臨床醫(yī)學(xué)論文兒童急性感染診斷

　　本篇文章是由《中國(guó)臨床解剖學(xué)》發(fā)表的醫(yī)學(xué)論文，旨在加強(qiáng)解剖學(xué)基礎(chǔ)理論研究與臨床實(shí)踐工作緊密結(jié)合，以促進(jìn)現(xiàn)代臨床醫(yī)學(xué)的發(fā)展，側(cè)重發(fā)表與臨床應(yīng)用密切相關(guān)的應(yīng)用解剖學(xué)、實(shí)驗(yàn)形態(tài)學(xué)、臨床生物力學(xué)等方面的學(xué)術(shù)論著。

　　摘　要：目的：總結(jié)人類偏肺病毒急性感染患兒的診斷經(jīng)驗(yàn)和臨床特點(diǎn)。方法：采用直接免疫熒光法對(duì)79例急性感染人類偏肺病毒的嬰幼兒進(jìn)行快速診斷，及時(shí)給予抗病毒治療及對(duì)癥治療。結(jié)果：79例患兒，臨床診斷為肺炎22例，支氣管肺炎18例，毛細(xì)支氣管炎17例，急性支氣管炎11例，喘息性疾病如哮喘、喘息性支氣管炎等11例，全部患兒痊愈，未出現(xiàn)并發(fā)癥，病程5～21 d，平均住院天數(shù)8 d。結(jié)論：采用直接免疫熒光技術(shù)檢測(cè)人類偏肺病毒抗原，操作和實(shí)驗(yàn)方法簡(jiǎn)便，診斷快速準(zhǔn)確，有利于早期病因治療，縮短病程，具有重要的社會(huì)經(jīng)濟(jì)效益。

　　關(guān)鍵詞：嬰幼兒;人類偏肺病毒;直接免疫熒光;診斷

　　呼吸道病毒是嬰幼兒冬春季感染性疾病的主要病原，研究表明以呼吸道合胞病毒(RSV)和流感病毒(Inf) 較常見，但是有部分患者仍無(wú)法確定其病原。人類偏肺病毒(Human metapneumovirus，hMPV) 歸屬于副黏病毒科偏肺病毒屬，是偏肺病毒屬里的第一個(gè)被發(fā)現(xiàn)能夠引起人類致病的病原體。它可以部分解釋以前不能診斷的病例，無(wú)疑減少了呼吸道感染中病原未明者的比例，同時(shí)也提示了要重新對(duì)各種呼吸道病毒在呼吸道感染中的作用進(jìn)行評(píng)估，對(duì)完整認(rèn)識(shí)兒童呼吸道感染的病毒病原譜是很好的補(bǔ)充。分析浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬兒童醫(yī)院收治的79例hMPV感染的患兒資料，總結(jié)相應(yīng)的診斷經(jīng)驗(yàn)和臨床特點(diǎn)，以期早診斷，早治療，緩解癥狀，減少交叉感染機(jī)會(huì)。

　　1 資料與方法

　　1.1 一般資料：選取2010年10月～2011年1月間因急性呼吸道感染入院治療的患兒，共計(jì)864例，年齡1個(gè)月～14歲，中位年齡2歲。診斷參照《實(shí)用兒科學(xué)》的相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)[1]：①急性起病;②臨床表現(xiàn)為咳嗽、咯痰或發(fā)熱等呼吸道癥狀;③X線及實(shí)驗(yàn)室檢查符合呼吸道感染征象。

　　1.2 診斷方法：入院24 h內(nèi)即采用無(wú)菌負(fù)壓抽取痰液法，將塑料導(dǎo)管經(jīng)患兒鼻腔插入7～8 cm達(dá)到咽部以下，吸取鼻咽部分泌物1～2 ml至無(wú)菌的0.9% NaCI溶液吸瓶中送檢，樣本置離心管中用漩渦混合器震蕩成懸液，1 500 r/min離心10 min，棄上清液和黏液層，沉淀物加適量PBS調(diào)整至適當(dāng)細(xì)胞濃度，微管吸取上述纖毛柱狀上皮細(xì)胞懸液制作細(xì)胞片，在樣片上點(diǎn)樣，每點(diǎn)加25 μl細(xì)胞懸液，自然干燥，冷丙酮固定10 min，風(fēng)干。在樣片和對(duì)照片的每個(gè)細(xì)胞點(diǎn)加l滴hMPV熒光抗體，37℃溫盒孵育30 min，用洗滌液洗滌后加1滴封閉液，封片后在熒光顯微鏡下觀察結(jié)果。D3-DFA hMPV抗原免疫熒光檢測(cè)試劑盒購(gòu)自美國(guó)DHI公司，以上步驟均按說(shuō)明書進(jìn)行操作，采用試劑盒內(nèi)陽(yáng)性和陰性對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)，并按陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)(200倍顯微鏡下每視野找到≥2個(gè)綠熒光細(xì)胞即為陽(yáng)性)判斷結(jié)果。熒光顯微鏡為日本Olympus BX60。

　　2 結(jié)果

　　對(duì)864例患者的痰液標(biāo)本進(jìn)行hMPV抗原檢測(cè)，有79例呈陽(yáng)性，占9.14%，被hMPV病毒感染的上皮細(xì)胞均顯示典型的綠色顆粒狀熒光。79例患兒中，男52例，女27例，男女比例約為2:1，年齡2個(gè)月～4歲3個(gè)月，中位年齡10個(gè)月，其中≤2歲的患者占90%。入院后體溫高熱(39℃以上)2例，中等熱(38℃～39℃)29例，低熱(38℃以下)40例，體溫正常8例，平均退熱時(shí)間2.5 d。實(shí)驗(yàn)室檢查，白細(xì)胞計(jì)數(shù)大部分在正常范圍或偏低，咽部痰液培養(yǎng)陰性，衣原體、支原體和7種常見呼吸道病毒檢測(cè)(RSV，甲、乙型流感，Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型副流感，腺病毒)均陰性。臨床診斷為肺炎22例，支氣管肺炎18例，毛細(xì)支氣管炎17例，急性支氣管炎11例，喘息性疾病如哮喘、喘息性支氣管炎等11例。確診hMPV病毒感染后及時(shí)給予利巴韋林或干擾素抗病毒治療，輔以對(duì)癥治療，對(duì)發(fā)熱、嘔吐、腹瀉等給予相應(yīng)處理，對(duì)痰液黏稠不易咳出或憋喘的患者行霧化吸入治療，以癥狀消失、體溫正常、復(fù)查胸片明顯好轉(zhuǎn)作為痊愈標(biāo)準(zhǔn)。所有患者均痊愈，未出現(xiàn)并發(fā)癥，病程5～21 d，平均8 d。

　　3 討論

　　hMPV是2001年由荷蘭學(xué)者Van den Hoogen等從呼吸道感染的兒童中首先發(fā)現(xiàn)并報(bào)道，近年來(lái)世界各地均有hMPV感染流行病學(xué)報(bào)道，提示該病毒的全球流行[2]。目前研究表明hMPV感染的流行病學(xué)特征和臨床表現(xiàn)與RSV感染相似，主要在冬春季流行，是社區(qū)兒童感染的重要病原，可以在任何年齡組引起感染，5歲以下兒童是易感人群。據(jù)統(tǒng)計(jì)北京地區(qū)冬春季6歲以下呼吸道感染兒童鼻咽洗液常見病毒陰性者中hMPV陽(yáng)性率達(dá)30%[3]。在臨床工作中，hMPV感染患者癥狀各異，輕者表現(xiàn)為咳嗽、發(fā)熱和流涕等上感癥狀，重者表現(xiàn)為下呼吸道感染，可誘發(fā)毛細(xì)支氣管炎、肺炎和哮喘等喘息性疾病，Garcia-Garcia等提出hMPV是引起哮喘的誘因之一。本研究檢測(cè)到的hMPV感染患者年齡多在2歲以下，提示嬰幼兒感染更為普遍，臨床診斷以肺炎、支氣管肺炎和毛細(xì)支氣管炎多見，另外在喘息性疾病如哮喘、喘息性支氣管炎患者中也檢出陽(yáng)性病例，與國(guó)外文獻(xiàn)報(bào)道相似，提示hMPV感染可能是引起兒童喘息性疾病的誘因之一[4]。

　　近年來(lái)國(guó)內(nèi)外學(xué)者報(bào)道多種檢測(cè)hMPV的方法，傳統(tǒng)病毒分離方法可用于檢測(cè)活病毒，RT-PCR可檢測(cè)病毒RNA，但hMPV在細(xì)胞培養(yǎng)中生長(zhǎng)緩慢，且條件要求高，PCR方法雖然快捷方便，但不同病毒診斷實(shí)驗(yàn)室間質(zhì)量控制水平參差不齊，都很難在臨床廣泛推廣[5]。本研究采用直接免疫熒光法，其原理是用FIFC標(biāo)記的hMPV病毒特異性單大隆抗體與細(xì)胞中相應(yīng)的病毒抗原結(jié)合下，形成抗原抗體復(fù)合物，熒光顯微鏡下細(xì)胞內(nèi)顯示蘋果綠熒光，研究認(rèn)為該法的敏感性可達(dá)94.1%，特異性為96.8%[6]。熒光顯微鏡直接觀察病毒病原體，特異性高，診斷直觀快速，實(shí)驗(yàn)條件簡(jiǎn)便，對(duì)于急性呼吸道感染者可以早發(fā)現(xiàn)、早治療，減少住院時(shí)間及不必要的抗生素治療，值得在臨床推廣應(yīng)用。

　　hMPV作為新發(fā)現(xiàn)的感染人類的肺病毒，目前臨床缺乏明顯有效的治療藥物和預(yù)防hMPV感染的特異疫苗，主要采用常規(guī)的抗病毒和對(duì)癥支持治療，防治并發(fā)癥，因此加強(qiáng)早期快速、規(guī)范化的診斷和隔離顯得尤為重要，其病原學(xué)、流行病學(xué)和臨床特征都有待進(jìn)一步深入的研究。

　　4 參考文獻(xiàn)

　　[1] 胡亞美,江載芳,諸福棠.實(shí)用兒科學(xué)[M].第7版.北京:人民衛(wèi)生出版社,2008:1169.

　　[2] Van den Hoogen B G,De jong J C,Green J,et al.A newly discovered human pneumovirus isolated from young children with respiratory tract disease[J].Nat Med,2001,7(6):719.

　　[3] 朱汝南,錢 淵,鄧 潔,等.北京地區(qū)六歲以下兒童急性呼吸道偏肺病毒感染[J].中華兒科雜志,2003,41(6):441.

　　[4] Garcia-Garcia ML,Cairo C,Perez,et al.Prevalence and elinical characteristics of human metapneumovirus infections in hospitalized in-fants in Spain[J].Pediatr Pulmonol,2006,41(9):863.

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