本文摘要：本篇文章是由《 中華醫(yī)學(xué) 》發(fā)表的一篇醫(yī)學(xué)論文，創(chuàng)刊于1995年，是由中華臨床醫(yī)學(xué)會(huì)主辦的臨床醫(yī)藥類專業(yè)學(xué)術(shù)期刊。在2000年10月被定為臨床醫(yī)藥類核心期刊。分別由我國(guó)著名的臨床專家執(zhí)編，全國(guó)各優(yōu)秀醫(yī)院院長(zhǎng)及專家為顧問團(tuán)，審稿嚴(yán)慎，因而期刊具有較高的
本篇文章是由《中華醫(yī)學(xué)》發(fā)表的一篇醫(yī)學(xué)論文，創(chuàng)刊于1995年，是由中華臨床醫(yī)學(xué)會(huì)主辦的臨床醫(yī)藥類專業(yè)學(xué)術(shù)期刊。在2000年10月被定為臨床醫(yī)藥類核心期刊。分別由我國(guó)著名的臨床專家執(zhí)編，全國(guó)各優(yōu)秀醫(yī)院院長(zhǎng)及專家為顧問團(tuán)，審稿嚴(yán)慎，因而期刊具有較高的實(shí)用性、指導(dǎo)性和權(quán)威性，是全國(guó)醫(yī)學(xué)界與社會(huì)各界互通通信息的重要渠道,是全國(guó)醫(yī)學(xué)界進(jìn)行學(xué)術(shù)交流、切磋醫(yī)學(xué)經(jīng)驗(yàn)的重要平臺(tái)。
【摘要】 目的 探討睡眠剝奪(sleep deprivation，SD) 對(duì)大鼠神經(jīng)內(nèi)分泌功能變化的影響。方法 將60只Wistar雄性大鼠隨機(jī)分為6組(每組10只)：空白對(duì)照組(C組)、 AS對(duì)照組(AS組)、ASSD1天組(SD1d組)、ASSD3天組(SD3d組)、ASSD5天組(SD5d組)、ASSD7天組(SD7d組)。5組建立AS模型后，其中4組再建立，SD模型，分析各組大鼠心電圖變化、生理及行為改變，測(cè)定各組大鼠血清中促腎上腺皮質(zhì)激素(adrenocorticotropic hormone，ACTH)及皮質(zhì)醇(cortisol，CORT)的含量。結(jié)果 SD后AS大鼠精神狀態(tài)逐漸轉(zhuǎn)差，反應(yīng)變遲鈍、變虛弱，隨著SD時(shí)間的延長(zhǎng)，AS大鼠呈先興奮，然后激惹，最后衰竭的變化趨勢(shì)。隨著SD的時(shí)間延長(zhǎng)，AS大鼠心率呈先增快后減慢的波動(dòng)性變化。心電圖ST-T逐漸上抬，T波高聳直立。ACTH及CORT水平呈先增高后下降的波動(dòng)性變化。結(jié)論 SD造成的應(yīng)激性刺激，能夠激活HPA軸，從而引起AS大鼠神經(jīng)內(nèi)分泌功能發(fā)生變化。
【關(guān)鍵詞】 睡眠剝奪 動(dòng)脈粥樣硬化 神經(jīng)內(nèi)分泌
睡眠剝奪(sleep deprivation，SD) 具體指人因環(huán)境或自身原因喪失了所需要睡眠量的一種過程和狀態(tài)。SD影響了機(jī)體固有的生物節(jié)律，使機(jī)體處于應(yīng)激狀態(tài)。本研究以神經(jīng)內(nèi)分泌系統(tǒng)所產(chǎn)生的促腎上腺皮質(zhì)激素(adrenocorticotropic hormone，ACTH)及皮質(zhì)醇(cortisol，CORT)為切入點(diǎn)，通過測(cè)定其在大鼠血清中的表達(dá)量在不同SD時(shí)間情況下的波動(dòng)情況，分析各組大鼠神經(jīng)內(nèi)分泌功能狀態(tài)，并結(jié)合各組大鼠心電圖變化、生理及行為改變來反映SD對(duì)大鼠神經(jīng)內(nèi)分泌功能變化的影響。
1材料與方法
1.1分組
60只Wistar雄性大鼠(由中山大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供)，體重(250±10
)g。隨機(jī)分為6組：空白對(duì)照組(C組)10只、大平臺(tái)對(duì)照組(A組)10只、ASSD1d組(SD1d組)10只、ASSD組3d組(SD3d組)10只、ASSD5d組(SD5d組)10只、ASSD7d組(SD7d組)10只。
1.2 建立大鼠AS 模型
參照文獻(xiàn)[1] 方法，50只大鼠在腹腔注射維生素D3 (60 萬u/ kg) 后，給予高脂飼料(3 %膽固醇，0. 5 %膽酸鈉，0. 2 %丙基硫氧嘧啶，5 %白糖，10 %豬油，81. 3 %基本飼料) 喂養(yǎng)8周可形成典型的AS 病變。
1.3 建立AS大鼠睡眠剝奪模型
以“改良多平臺(tái)水環(huán)境SD法”制備SD模型[2]。將4組大鼠，每組各放在一個(gè)裝有15個(gè)小平臺(tái)的水槽中飼養(yǎng)(主要是利用大鼠怕水及在水中無法進(jìn)入睡眠的生活習(xí)性，通過在盛水的水槽中放置平臺(tái)，讓大鼠站立在平臺(tái)上，大鼠在平臺(tái)上可自由進(jìn)食飲水，并可在平臺(tái)間自由活動(dòng)。因平臺(tái)直徑足夠小(直徑6.5cm)，若其睡眠，會(huì)因全身肌張力降低引起節(jié)律性低頭、觸水或落入水中驚醒，來達(dá)到SD的目的)，以此建立起ASSD模型。SD1d組為持續(xù)SD1天，SD3d組為持續(xù)SD3天，SD5d組為持續(xù)SD5天，SD7d組為持續(xù)SD7天。為排除隔離及水環(huán)境造成的影響，將A組10只大鼠放置在大平臺(tái)上飼養(yǎng)，采用與SD組大小一樣的水箱，但在其底部放置的平臺(tái)大小為30cm×18cm×8cm，大鼠在平臺(tái)上有一定活動(dòng)空間，可以自由睡眠，用以形成與SD各組相似的環(huán)境，其他環(huán)境與實(shí)驗(yàn)組相同。C組采用正�；\養(yǎng)，自然晝夜光照，喂基礎(chǔ)飼料。實(shí)驗(yàn)前1周將實(shí)驗(yàn)所需大鼠放至一只籠中飼養(yǎng)，熟悉適應(yīng)環(huán)境1周。
1.4 觀察各組大鼠生理及行為改變
觀察各組大鼠的精神狀態(tài)、反應(yīng)能力以及行為表現(xiàn)的變化。
1.5 各組大鼠心電圖監(jiān)測(cè)
將大鼠用20%烏拉坦0.8ml/kg注射麻醉，約5min待大鼠安靜后，在小動(dòng)物實(shí)驗(yàn)臺(tái)上仰臥固定大鼠。接通RM-6000多通道生理儀電源，打開機(jī)器，將針電極(注射器針頭連于電極)分別向心刺入大鼠四肢皮下，電極連線分為紅色(R)右上肢、黃色(L)左上肢、黑色(RF)右下肢、綠色(LF)左下肢。描記標(biāo)準(zhǔn)導(dǎo)聯(lián)II導(dǎo)聯(lián)體表心電圖并進(jìn)行分析，記錄心率及ST段位移值。描記條件為：標(biāo)準(zhǔn)電壓：為20mm/mV，描記速度為50mm/s。通過觀察心電圖ST位移值(ST段位移值變化以QRS波群起點(diǎn)連線為基線，測(cè)量點(diǎn)取J點(diǎn)后0.02s)可反映心肌缺血程度。心電圖形及間期測(cè)量方法按徐叔云等[3]方法進(jìn)行。
1.6 各組大鼠血清ACTH及CORT含量測(cè)定
各組大鼠在相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)用10%水合氯醛(0.3 m1/100 g體質(zhì)量)大鼠腹腔注射麻醉，用毛細(xì)玻管眶內(nèi)靜脈取血2 ml， EDTA抗凝，靜置0.5 h后4℃，3 000 r/min離心10 min，取血漿1 ml，保存在-70℃的冰箱中，以備待測(cè)ACTH和CORT的含量。用放射免疫分析法統(tǒng)一測(cè)定ACTH和CORT含量，按試劑盒說明書進(jìn)行操作。ACTH及CORT試劑盒由南京建成生物工程研究所提供。
1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
采用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件，計(jì)數(shù)資料以 _ X±s表示，組間均數(shù)比較采用完全隨機(jī)設(shè)計(jì)單因素方差分析，多組間兩兩比較采用LSD檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
2結(jié)果
2.1 各組大鼠生理及行為改變 SD后大鼠精神狀態(tài)逐漸轉(zhuǎn)差，反應(yīng)變遲鈍，食欲不振，身體漸消瘦、變虛弱，皮毛變粗糙、蓬亂而沒有光澤。SD初期，大鼠精神亢奮，對(duì)聲音、氣味、光線等刺激的反應(yīng)較敏捷。行為興奮性提高，較為活躍。到SD第3天時(shí)，SD3d組中所有大鼠出現(xiàn)磕睡、節(jié)律性垂頭現(xiàn)象，并常因鼻子浸入水中或掉入水中而驚醒。到SD第5天時(shí)，SD5d組中所有大鼠表現(xiàn)煩躁、易怒、相互之間喜撕咬、打斗。至SD第7天時(shí)，SD7d組中所有大鼠均表現(xiàn)為呼吸加快，精神萎靡，而對(duì)聲音、氣味、光線等刺激的敏感性下降。低頭駝背，蜷縮顫抖，不喜動(dòng)，活動(dòng)能力明顯減退。進(jìn)食少，身體極度虛弱。
2.2 各組大鼠心率變化
SD后大鼠心率變化較大。SD剛開始時(shí)大鼠心率先是極度增快，于SD1d時(shí)心率最快達(dá)到最高值，與SD5d組及SD7d組相比較，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.001)。隨著SD時(shí)間的延長(zhǎng)，心率逐漸減慢。
與C組比較，a p<0.01;與AS組比較，b p<0.01;與 SD1d組比較，c p<0.01;與SD3d組比較，d p<0.01;與SD5d組比較，e p<0.01。
2.3 各組大鼠心電圖ST-T改變
C組大鼠心電圖ST-T改變與SD3d組、SD5d組及SD7d組比較，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。A組與SD5d組及SD7d組比較，均有顯著性差異(P<0.001)。SD1d組與SD5d組及SD7d組比較，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.001)。SD3d組與SD5d組及SD7d組間兩兩比較，均有顯著性差異(P<0.001)。隨著SD的時(shí)間延長(zhǎng)，大鼠心電圖ST-T逐漸上抬，T波高聳直立。(見表2，圖1-6)
表2 各組大鼠心電圖ST-T改變( _ X±s)
2.4 大鼠血清ACTH含量變化
C組、A組、SD1d組三組之間相互兩兩比較無顯著性差異(P>0.05)。該三組分別與SD3d組、SD5d組、SD7d組間相互兩兩比較差異均有顯著性(P<0.001)。隨著SD時(shí)間的延長(zhǎng)，大鼠血清ACTH含量，先呈現(xiàn)升高的趨勢(shì)，并在SD3d時(shí)大鼠血清ACTH含量達(dá)到最高值，與SD5d組、SD7d組間比較差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.001)。之后大鼠血清ACTH含量呈明顯的下降趨勢(shì)，至SD7d時(shí)，其ACTH含量最低，與SD5d組比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.001)。(見表3)
表3 各組大鼠血清ACTH含量變化( _ X±s)
與C組比較， a p<0.01;與AS組比較，b p<0.01;與 SD1d組比較，c p<0.05，d p<0.01;與SD3d組比較，e p<0.01;與SD5d組比較，f p<0.01。
2.5 大鼠血清CORT含量變化
C組、A組、SD1d組、SD3d組、SD5d組及SD7d組間相互兩兩比較，均有顯著性差異(P<0.05)。隨著SD時(shí)間的延長(zhǎng)，大鼠血清CORT含量先呈逐漸升高趨勢(shì)，至SD5d時(shí)達(dá)到最高值，CORT含量約為C組的2倍，之后降低。(見表4)
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