本文摘要：海綿中含有豐富的生物活性物質(zhì)。海綿(Marine sponge) 是屬于動(dòng)物界、海綿動(dòng)物門(mén)(spongia)的一類(lèi)低等多細(xì)胞海洋生物。小編介紹一篇關(guān)于海綿動(dòng)物的一篇論文。 摘要： 本論文樣品采集地于湛江近海海域，利用有機(jī)溶劑石油醚，三氯甲烷，正丁醇和乙酸乙酯提取海綿
海綿中含有豐富的生物活性物質(zhì)。海綿(Marine sponge) 是屬于動(dòng)物界、海綿動(dòng)物門(mén)(spongia)的一類(lèi)低等多細(xì)胞海洋生物。小編介紹一篇關(guān)于海綿動(dòng)物的一篇論文。
摘要： 本論文樣品采集地于湛江近海海域，利用有機(jī)溶劑石油醚，三氯甲烷，正丁醇和乙酸乙酯提取海綿中的化學(xué)成分，用凝膠色譜(GPC)，氣相—質(zhì)譜聯(lián)用儀(GC/MS)，高效液相和液質(zhì)聯(lián)用儀等光譜技術(shù)進(jìn)行鑒定，分析海綿含有的化學(xué)成分。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，此次采摘的海綿中含有多種化合物，并確實(shí)了其中Hexanedioic acid bis(2-ethyLhexyL) ester、 n-Hexadecanoic acid、 1,3-CycLopentanedione、2,4-dimethyL-，1,2-DithioLane-3-pentanoic acid Tetradecanoic acid五種化合物，26種化合物的分子量，但還有多種物質(zhì)還有待進(jìn)一步分析。
關(guān)鍵詞： 海綿;分離提純;化學(xué)成分
0引言
從海水、海底沉積土到海洋動(dòng)植物,以及一些熱泉涌、水熱狹縫等,包羅萬(wàn)象的生態(tài)圈,造就了海綿共附生微生物一個(gè)復(fù)雜多樣的群體,同時(shí),產(chǎn)生了獨(dú)特的有別于陸地微生物的多種具有生物活性的次級(jí)代謝產(chǎn)物。本研究利用海南豐富的海綿資源，從中篩選出化合物，通過(guò)色譜、光譜分析技術(shù)鑒定其結(jié)構(gòu)特征，并分析其生物活性。有望篩選出結(jié)構(gòu)與活性不同于其他海洋來(lái)源的化合物，為進(jìn)一步開(kāi)發(fā)新的海洋藥物提供生物資源，具有非常重要的意義。
1材料方法
1.1 材料樣品采集地：湛江近海海域。樣品處理：從海水中采摘健康的海綿樣品后，分別置于無(wú)菌塑料袋中，一般在2h內(nèi)送回實(shí)驗(yàn)室處理，不能及時(shí)送回實(shí)驗(yàn)室的則放于冰盒內(nèi)低溫短時(shí)間保存。
1.2 試劑與儀器
三氯甲烷分析醇廣州化學(xué)試劑廠產(chǎn)品
正丁醇分析醇廣州化學(xué)試劑廠產(chǎn)品
乙酸乙酯分析醇廣州化學(xué)試劑廠產(chǎn)品
石油醚分析醇天津市福晨化學(xué)試劑廠產(chǎn)品
10mL移液槍
HP6890/5973MSD 氣相色譜—質(zhì)譜聯(lián)用儀
HPLC高效液相儀/氨基酸分析儀(Water 2487 duaLλ absorbance detector)
agiLent 1100-esquire hct液質(zhì)聯(lián)用儀
GPC凝膠滲透色譜儀(分子量測(cè)試范圍：150—270，000)
真空干燥箱DZX—3型(6020B)寧波海曙賽福實(shí)驗(yàn)儀器廠
1.3 實(shí)驗(yàn)方法
1.3.1 化合物的提取分離海綿用無(wú)菌海水浸洗3遍，然后擠干，以去除表面附著物及夾帶的海水微生物。用無(wú)菌剪刀進(jìn)行解剖，用2mL 甘油保存。實(shí)驗(yàn)時(shí)，用5mL 95%工業(yè)酒精浸取3次，每次24小時(shí)。提取物冷凍干燥成白色粉末后，將濃縮物分散于5mL水中，再用各2mL，1.5mL，1.5mL石油醚分別提取三次，得可溶物5mL，再用極性逐漸增大的三氯甲烷，正丁醇，乙酸已脂以同樣的方法提取三次，各得可溶物5mL，提取余相水溶物5mL。
1.3.2 氣相—質(zhì)譜聯(lián)用儀測(cè)定有機(jī)相分別取200μL用于氣相—質(zhì)譜連用儀(GC/MS)進(jìn)行測(cè)定分析。色譜條件為： 色譜柱 HP-FFAP(30m×0.25mm, 0.25μm),60°C ，4°C/min→150°C， 6°C/min，250°C，進(jìn)樣溫度 250°C，載氣 He，分流比 80：1，柱流量 1.0μm/min;質(zhì)譜條件為：EI源，電離電壓 70ev，離子源溫度 230°C，掃描范圍 40-500aum，進(jìn)氣量 1μL。
1.3.3 高效液相色譜測(cè)定有機(jī)相冷凍干燥后用于高效液相及液質(zhì)聯(lián)用儀進(jìn)行測(cè)定分析。高效液相分析儀條件為：分離系統(tǒng)：WATERS 2695 separations moduLe，色譜柱：Waters C-18(3×15mm)，柱溫：25±5℃，流動(dòng)相：甲醇，水梯度洗脫，洗脫條件如表1。
檢 測(cè) 器：Waters 2487 duaL λ absorbance detector，檢測(cè)波長(zhǎng)： 254nm，進(jìn)樣量：6μL，控制系統(tǒng)：Waters empower 軟件。供試品溶液配制：正丁醇萃取液中加入800μL甲醇，三氯甲烷提取物、石油醚提取物以及乙酸乙酯提取物中加入1.3mL甲醇，混勻后以12000轉(zhuǎn)的轉(zhuǎn)速離心15min。取上層溶液待分析用。
1.3.4 液質(zhì)聯(lián)用儀測(cè)定液質(zhì)聯(lián)用儀分析條件為：儀器型號(hào)為agiLent 1100-esquire hct，色譜柱C18，內(nèi)徑4.60*300mm，流動(dòng)相甲醇+水梯度洗滌，洗脫條件如表2。
對(duì)水溶物做凝膠色譜分析，GPC的條件為：示差檢測(cè)器 Waters 1515+2414，兩根柱子串聯(lián)：型號(hào)分別是uLtrahydrogeLTM120和uLtrahydrogeLTM500，柱溫55℃，檢測(cè)器溫度50℃，流動(dòng)相：水流速：0.6mL/min。
1.3.5 凝膠色譜測(cè)定柱子型號(hào)：UltrahydrogelTM500、UltrahydrogelTM120(分子量范圍100～40萬(wàn)，雙柱串聯(lián))。填料：葡聚糖。柱溫55℃。流動(dòng)相：純水。流動(dòng)相速度：0.6ml/min。Waters 泵1515，示差檢測(cè)器2414;檢測(cè)器50℃。
2結(jié)果分析
2.1 氣相—質(zhì)譜聯(lián)用儀(GC/MS )結(jié)果及分析①正丁醇提取液分析(圖1)。結(jié)果顯示正丁醇提取液中含有4種化合物： a)出峰時(shí)間在36.02處有一個(gè)化合物：結(jié)構(gòu)為：Hexanedioic acid, bis(2-ethyLhexyL) ester，分子量：370.31，分子式：C22H42O4。b)出峰時(shí)間在36.90處有一個(gè)化合物：結(jié)構(gòu)為：n-Hexadecanoic acid，分子量：256.24，分子式：C16H32O2。c)出峰時(shí)間在39.68處有一個(gè)化合物：結(jié)構(gòu)為：1，3-CycLopentanedione，2，4-dimethyL-，分子量：126.07，分子式：C7H10O2。d)出峰時(shí)間在40.73處有一個(gè)化合物：結(jié)構(gòu)為：1，2-DithioLane-3-pentanoic acid，分子量：206.04，分子式：C8H14O2S2。②石油醚提取液分析(圖2)。結(jié)果顯示石油醚提取液中含有1種化合物：Tetradecanoic acid。分子量：228.21，分子式：C14H28O2。
2.2 高效液相結(jié)果及分析:( 圖均已積分)①正丁醇提取液分析(圖3)。②石油醚提取液分析(圖4)。③三氯甲烷提取液分析(圖5)。④乙酸乙酯提取液分析(圖6)。
2.3 液質(zhì)聯(lián)用儀結(jié)果分析①正丁醇提取液分析(圖7、8)。分析結(jié)果有八個(gè)化合物存在，并占有一定含量。其中以6號(hào)化合物感應(yīng)強(qiáng)度最大，且在一級(jí)質(zhì)譜圖中可以明顯確定其分子量為565.6(MS m/s:566.6(M+);588.6(M+Na)，見(jiàn)圖9和圖10)。和背景化合物比較,可以確定為新的化合物。其他化合物由于現(xiàn)有條件無(wú)法做出更深一步的判斷，待以后深入研究。同時(shí)，實(shí)驗(yàn)中曾改變紫外波長(zhǎng)為210進(jìn)行比較分析，但是最后由于波長(zhǎng)210下的色譜和質(zhì)譜比較重合性較差，所以選擇波長(zhǎng)外280的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。但波長(zhǎng)210下的分析數(shù)據(jù)可供參考，為以后進(jìn)一步研究做參考。見(jiàn)圖11。②乙酸乙酯提取液分析(圖12、13)。分析結(jié)果有四個(gè)比較明顯的化合物存在，并占有一定含量。但化合物由于現(xiàn)有條件無(wú)法做出更深一步的判斷，待以后深入研究。它們的質(zhì)譜圖如圖14-17。
2.4 凝膠色譜結(jié)果及分析(圖18-20)分析結(jié)果表明：水相中化合物有兩大類(lèi)，分子量大概在10，000左右和小于100的化合物存在，并占有相當(dāng)大含量。但由于現(xiàn)有條件無(wú)法做出更深一步的判斷，待以后深入研究。
以下為凝膠色譜的標(biāo)準(zhǔn)圖如圖21：
分子量分別為：277000、12900、1460、106。
3討論與小結(jié)
本論文的研究工作主要取得以下結(jié)果：①以海綿為分離樣品，采用多種分離技術(shù)分離得到多種化合物。結(jié)果表明，石油醚，三氯甲烷，正丁醇，乙酸乙酯分別能提取到有機(jī)化合物，而水相中也能得到化合物。②以氣相—質(zhì)譜聯(lián)用儀分析技術(shù)分離得到Hexanedioic acid、bis(2-ethyLhexyL)ester、n-Hexadecanoic acid、1,3-CycLopentanedione、2,4-dimethyL-，1,2-DithioLane-3-pentanoic acid5種化合物。③石油醚，三氯甲烷，正丁醇，乙酸乙酯提取液經(jīng)高效液相技術(shù)分離共得到26種化合物。其中有些物質(zhì)是重復(fù)的，說(shuō)明很多化合物可能是同時(shí)溶于有機(jī)相或同時(shí)溶于其中某幾項(xiàng)。同時(shí)也說(shuō)明有些化合物的性能或結(jié)構(gòu)是非常相似，在一定程度上比較難以分離，需改進(jìn)技術(shù)或改變方法來(lái)進(jìn)行深一步的研究試驗(yàn)。④以液質(zhì)聯(lián)用儀分離技術(shù)分離得到12個(gè)不同分子量的化合物。其中以分子量為565. 6(MS m/s:566.6(M+);588.6(M+Na))的化合物可以確定為新化合物，因?yàn)樵谏V庫(kù)和相關(guān)文獻(xiàn)中都沒(méi)提及過(guò)該分子量的化合物。以后的研究工作將以此化合物為重點(diǎn)進(jìn)行研究，相信通過(guò)更深入的分析鑒定，能確定該化合物的結(jié)果和特征。⑤以凝膠色譜分析技術(shù)得到溶于水相中的化合物有兩大類(lèi)，分子量大約在10，000Da左右和小于100Da，兩者都有相當(dāng)高含量。根據(jù)現(xiàn)有條件，估計(jì)分子量小于100的化合物中可能有海綿中的一些小分子的酸和堿等化合物，當(dāng)然也可能是實(shí)驗(yàn)的誤差，使一些甘油未除盡，所以還有點(diǎn)甘油存在;而分子量在10，000左右的化合物很可能是一些不易溶于以上4種有機(jī)溶劑的高分子聚合物，當(dāng)然也有可能是提純過(guò)程中留下的極小部分的細(xì)胞碎片。⑥本研究利用該領(lǐng)域還未有人用氣質(zhì)聯(lián)用儀，液質(zhì)聯(lián)用儀技術(shù)來(lái)互補(bǔ)分析海綿中的有機(jī)物成分，通過(guò)對(duì)有機(jī)相和無(wú)機(jī)相的分析，對(duì)海綿中的化合物分離提取是比較全面的。但是由于客觀條件的限制，目前的研究結(jié)果中仍存在有未確定的化合物，例如水相中分子量在10，000左右的化合物和質(zhì)譜中有顯示而色譜中未能查到的化合物，及質(zhì)譜中一些含量不高的小峰所代表的化合物作更深入的研究奠定了一定的基礎(chǔ)。
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