農業(yè)副高晉升正高論文范文(兩篇)

　　下面是兩篇農業(yè)副高晉升正高論文，第一篇論文介紹了休閑生態(tài)農業(yè)互聯(lián)網+模式與優(yōu)化，從我國休閑生態(tài)農業(yè)的發(fā)展入手提供個性化和精準化的推薦。第二篇論文介紹了熱帶假絲酵母唑類耐藥相關基因，分析了熱帶念珠菌的唑類耐藥率升高給臨床治療帶來了阻力，為臨床提供參考和依據(jù)。

　　《休閑生態(tài)農業(yè)互聯(lián)網+模式與優(yōu)化》

　　摘要互聯(lián)網應用到農業(yè)領域已經成為了當前農業(yè)發(fā)展的大趨勢。從我國休閑生態(tài)農業(yè)發(fā)展現(xiàn)狀及存在問題入手，在對上海地區(qū)進行探索型調研的基礎上，分析了互聯(lián)網+在我國休閑生態(tài)農業(yè)的運用現(xiàn)狀與問題，提出了運用互聯(lián)網+推動我國休閑生態(tài)農業(yè)發(fā)展的對策：要做好切實可行的休閑生態(tài)農業(yè)電子商務的發(fā)展規(guī)劃;增強信息檢索服務，提供個性化和精準化推薦;要配合電子商務，利用雙重質檢打造可視化新模式，提升信用保障。

　　關鍵詞休閑生態(tài)農業(yè);互聯(lián)網+;電子商務;探索性調研;以上海為例

　　目前，在大多數(shù)城市的偏遠及農村地區(qū)，如上海和北京的郊區(qū)和農村，已經形成了一定規(guī)模的生態(tài)農家樂，相對于城市的現(xiàn)代化，許多都市人都開始選擇這樣的農家樂作為周末及節(jié)假日的娛樂體驗[1]。為了解現(xiàn)有的休閑生態(tài)農業(yè)企業(yè)運營模式及如何運用電子商務發(fā)展現(xiàn)有休閑生態(tài)農業(yè)，筆者展開了探索性調研。

　　通過實地調研上海的85家生態(tài)農家樂、生態(tài)農莊等后發(fā)現(xiàn)，有近20家休閑生態(tài)農業(yè)企業(yè)已經具備了一定的規(guī)模和體量，客流量也趨于穩(wěn)定，形成了產業(yè)化經營的項目，收入穩(wěn)定，效益高，也比較容易持久發(fā)展。但同時，也有很大一部分休閑生態(tài)農家樂在運營前沒有規(guī)劃;有些規(guī)劃者自己也沒有農莊生產經營的經驗，只是以場地來規(guī)劃自己的項目，而不是根據(jù)個人的資金和市場來選擇做什么項目，再根據(jù)場地的特點去進行規(guī)劃和設計，如此便造成布局混亂以及資金的無效使用。許多個體經營的生態(tài)農家樂沒有自己的品牌，生產出的生態(tài)農產品質量良莠不齊，消費者的權益無法得到保障，自然也就不會選擇去這樣的生態(tài)農家樂或農莊消費。

　　雖然休閑生態(tài)農業(yè)企業(yè)的現(xiàn)狀并非很樂觀，但是，隨著互聯(lián)網的發(fā)展及普及，休閑生態(tài)農業(yè)企業(yè)的發(fā)展充滿了機遇，存在很大的潛在發(fā)展空間。目前，互聯(lián)網應用到農業(yè)領域已經成為農業(yè)發(fā)展的大趨勢，互聯(lián)網已經在農場運營、產品生產跟蹤與銷售等領域逐漸普及，無論是在城市還是偏遠的農村，都能夠見到互聯(lián)網應用于農業(yè)的影子[2]。就目前發(fā)展形勢而言，互聯(lián)網對我國農業(yè)發(fā)展起到了巨大的推動作用，可以預見在不久的將來，我們的農業(yè)會更加迅速地與國際接軌，向現(xiàn)代化生態(tài)農業(yè)的方向推進。本文分析了我國休閑生態(tài)農業(yè)的發(fā)展現(xiàn)狀和存在問題，在對上海地區(qū)休閑生態(tài)農業(yè)進行調研的基礎上，分析了互聯(lián)網+在我國休閑生態(tài)農業(yè)的運用現(xiàn)狀與存在的問題，提出了運用互聯(lián)網+推動我國休閑農業(yè)發(fā)展的對策，對嘗試互聯(lián)網+特色農業(yè)電商營運的發(fā)展模式有積極意義。

　　1我國休閑生態(tài)農業(yè)發(fā)展現(xiàn)狀及存在問題

　　休閑生態(tài)農業(yè)模式在我國是一種重要的生態(tài)農業(yè)模式。它指以生態(tài)農業(yè)作為基礎，結合農業(yè)的觀光、休閑、教育和自然等多功能特征，形成具有第三產業(yè)特征的農業(yè)生產經營的形式[3]。該農業(yè)生產經營形式主要包括有高科技生態(tài)農業(yè)園、精品型生態(tài)農業(yè)公園、生態(tài)休閑村和生態(tài)農莊等。

　　1.1發(fā)展現(xiàn)狀

　　如今，越來越多的城市居民選擇到農村度假，休閑生態(tài)農業(yè)方興未艾。數(shù)據(jù)顯示[4]，截止2016年底，全國各類休閑生態(tài)農業(yè)年接待游客近21億人次，營業(yè)收入已經超過了5700億元。預計隨著人們生活水平的提升，我國休閑生態(tài)農業(yè)仍有非常大的發(fā)展空間。中商產業(yè)研究院發(fā)布的《2016—2021年中國休閑農業(yè)行業(yè)市場分析及投資前景咨詢報告》指出，在“十三五”期間，我國的休閑生態(tài)農業(yè)接待人次和經營收入將會增長15%左右。到2020年，休閑生態(tài)農業(yè)將成為橫跨農村一、二、三產業(yè)的新興產業(yè)，市場規(guī)模將接近7665億元，也將會成為促進農民就業(yè)、增收與滿足居民休閑及娛樂需求的民生產業(yè)�？傮w來看，我國具有發(fā)展休閑生態(tài)農業(yè)的資源稟賦優(yōu)勢。華東和華中地區(qū)的休閑生態(tài)農業(yè)資源占比最為豐富，休閑生態(tài)農業(yè)的發(fā)展水平也較高;而東北和西北地區(qū)發(fā)展休閑生態(tài)農業(yè)則存在先天的不足[5]。各地休閑生態(tài)農業(yè)的發(fā)展情況如表1所示。由于城市化進程和各地經濟發(fā)展水平的差異，我國休閑生態(tài)農業(yè)的發(fā)展也呈現(xiàn)出不均衡發(fā)展的特點：北京、上海以及東南沿海發(fā)達地區(qū)，休閑生態(tài)農業(yè)發(fā)展較早，服務水平較高，業(yè)態(tài)也較為豐富;云南、新疆、四川、河南等旅游業(yè)較為發(fā)達地區(qū)也較早引入了先進的休閑生態(tài)農業(yè)技術，并同時發(fā)展了旅游、農、漁、牧業(yè)。

　　1.2存在的問題

　　1.2.1缺乏宏觀控制和指導目前，我國的休閑生態(tài)農業(yè)還處在起步階段，尚未形成比較統(tǒng)一的區(qū)域規(guī)劃以及合理布局。由于缺乏宏觀控制和指導，一些地方政府在看到休閑觀光農業(yè)項目在帶動區(qū)域經濟發(fā)展中的成功經驗后，忽視了各地資源稟賦的差異、各地經濟發(fā)展模式的不同，在缺少深入調研內、外部發(fā)展環(huán)境的基礎上，盲目效仿投資，不僅造成資源浪費和低水平重復建設，而且增加了投資的風險，耽誤了地區(qū)經濟轉型升級發(fā)展的良好時機。

　　1.2.2檔次較低、功能單一總體上，我國高品位、多功能、知識型特點的休閑生態(tài)農業(yè)項目較少，大多數(shù)休閑生態(tài)農業(yè)項目都存在規(guī)模小、檔次低、布局分散等特點。究其原因如下：①由于部分項目缺乏可以長久發(fā)展的特色農業(yè)，加之人文景觀、自然風光等資源條件基礎不夠堅實，造成檔次不高;②由于我國休閑觀光農業(yè)的內涵挖掘不夠，功能較單一，沒有能做到很好地把農業(yè)基地建設、游客觀光、休閑度假以及旅游產品開發(fā)等有機結合起來。

　　1.2.3營銷傳播手段單一、力度較弱我國很多休閑生態(tài)農業(yè)經營者由于知識素養(yǎng)層次較低，對現(xiàn)代營銷技術與理念掌握不夠，導致營銷傳播的力度不夠，效果不佳。具體表現(xiàn)為以下方面：①不少休閑觀光農業(yè)景點的營銷傳播手段單一，大部分依賴于口碑傳播，導致接受信息的受眾較少，制約了市場的拓展力度;②很多休閑生態(tài)農業(yè)經營者忽視新媒體、互聯(lián)網等傳播手段，對新媒體、互聯(lián)網營銷傳播的投入較少，也在很大程度上影響了游客對項目的了解和認知，不利于市場的開發(fā)。

　　1.3休閑生態(tài)農業(yè)運用互聯(lián)網+的優(yōu)勢

　　應該說，休閑生態(tài)農業(yè)在其20多年的發(fā)展歷程中嘗試過許多營銷模式。在地方政府的支持下，不少休閑生態(tài)農業(yè)項目的營銷規(guī)模、造成的聲勢和效果甚至不亞于任何一個成熟的商業(yè)項目。但是，總體上，受資金缺乏、經驗不足、行業(yè)發(fā)展基礎薄弱等因素的影響，我國休閑生態(tài)農業(yè)依然處于產業(yè)發(fā)展的起步階段，未來市場空間十分巨大[6]。隨著互聯(lián)網技術的興起和國家互聯(lián)網+戰(zhàn)略的提出，不少休閑生態(tài)農業(yè)企業(yè)已經開始運用互聯(lián)網+的理念、技術和商業(yè)模式，提高了市場占有率，擴大了銷售。筆者認為，在互聯(lián)網+環(huán)境下，利用互聯(lián)網信息技術搭建的農業(yè)特色產品的銷售交易平臺，將使農產品的生產交易流程扁平化，不僅拉近農產品產、銷之間的距離，而且減少農產品從產地到餐桌的流通環(huán)節(jié)，降低交易成本[7]。此外，還可以實現(xiàn)農產品產銷的充分對接和產地追溯，能夠大大減少生產的盲目性，實現(xiàn)全天候銷售，保障產品質量。

　　2互聯(lián)網+在我國休閑生態(tài)農業(yè)的運用現(xiàn)狀與問題

　　2.1運用現(xiàn)狀

　　互聯(lián)網+休閑生態(tài)農業(yè)主要依托的是計算機網絡的通信技術，按照交易對象的不同，主要有B2B和B2C兩種運作模式[8]。B2B模式主要針對休閑農業(yè)中的一些旅行社、鄉(xiāng)村旅游企業(yè)等;B2C模式則主要針對客戶提供一些更方便其使用的信息咨詢�；�于B2C模式下[9]的電子商務平臺，游客可以直接在網上方便地選購自己想要的休閑旅游產品�，F(xiàn)在許多B2B、B2C平臺，如淘寶網、京東和易購等綜合性的網上交易平臺，休閑生態(tài)農業(yè)企業(yè)可直接進入并銷售產品或作為這些平臺的供貨商。通過這樣的方式，休閑農業(yè)企業(yè)能夠借助具有強大競爭力的平臺力量，增加自己的網絡銷售渠道。

　　這些電子商務交易平臺可提供4種運作模式，即站點平臺模式、分銷模式、引擎搜索模式以及直銷預訂模式。其中，站點平臺模式為農村休閑旅游企業(yè)之間或農村休閑旅游企業(yè)與游客之間提供了一個活動的平臺，方便他們之間的銷售操作和往來;分銷模式主要針對相關休閑農業(yè)旅游產品的預訂，如客房、機票或旅游路線等;引擎搜索模式主要為各種休閑旅游產品及服務提供一個有效的價格對比平臺;直銷預訂模式，即省去中間環(huán)節(jié)的一種經營模式，方便休閑農業(yè)企業(yè)與游客之間的有效溝通和交流。以調研的上海若田小鎮(zhèn)為例。上海若田小鎮(zhèn)是位于上海市浦東新區(qū)大團鎮(zhèn)的一家生態(tài)農莊企業(yè)。該農莊企業(yè)依靠互聯(lián)網平臺取得了快速發(fā)展。不同于傳統(tǒng)生態(tài)農業(yè)企業(yè)，若田小鎮(zhèn)以休閑、度假、自駕游為主，吸引一些戶外、野營游客，借助互聯(lián)網+的優(yōu)勢，通過美團、去哪兒網等電子商務平臺定時發(fā)布活動消息，用民俗村、農家樂等生態(tài)休閑特色吸引了不少游客歇腳、就餐，體驗遠離喧囂城市的淳樸鄉(xiāng)村生活，也幫助企業(yè)提升了很大的客流量。特別是在夏、秋旅游旺季，接待游客數(shù)量和營業(yè)收入等得到了很大提升。表2所示為若田小鎮(zhèn)運用互聯(lián)網+前、后的情況比較。

　　2.2存在的問題

　　2.2.1運用水平整體較為低下總體上，休閑農業(yè)企業(yè)一般都地處較為偏僻的農村地區(qū)，這些地方交通多不發(fā)達，信息相對閉塞[10]，當?shù)卣�府對于電子商務缺乏必要的認知，對如何利用互聯(lián)網+發(fā)展休閑生態(tài)農業(yè)，缺乏統(tǒng)一、明確的發(fā)展規(guī)劃，從而導致休閑生態(tài)農業(yè)應用電子商務的整體水平較低。許多休閑農企以家庭為單位經營，規(guī)模較小，且農場主多為中年人，對互聯(lián)網技術的掌握并不深入，有些甚至完全沒有電子商務平臺擴展的意愿，這在很大程度上限制了休閑農業(yè)中的網絡貿易。此外，我國電子商務行業(yè)起步較晚，也就不可避免地導致了休閑農業(yè)電子商務水平整體較低下。筆者通過探索性調研，對上海地區(qū)的85家生態(tài)農家樂、生態(tài)農莊進行了深入調查、訪談與數(shù)據(jù)分析。調研結果發(fā)現(xiàn)，只有24%的休閑生態(tài)農業(yè)企業(yè)在電子商務平臺上具有了一定規(guī)模的發(fā)展，形成了產業(yè)化經營;有33%的休閑生態(tài)農業(yè)企業(yè)在采購、營銷、售后服務等部分價值鏈環(huán)節(jié)運用了互聯(lián)網+理念和技術，但運行情況并不太好;另外，有42%的休閑生態(tài)農業(yè)企業(yè)的運營仍然停留在傳統(tǒng)的方式上，幾乎沒有涉及互聯(lián)網技術。表3所示為上海生態(tài)農業(yè)企業(yè)運用互聯(lián)網+情況匯總�？傊�，上海作為全國經濟發(fā)展水平的龍頭之一，休閑生態(tài)農業(yè)企業(yè)在互聯(lián)網+的運用方面仍有非常大的空間可以拓展和深化。以上可見，我國休閑生態(tài)農業(yè)運用互聯(lián)網+的一個大致的水平與發(fā)展?jié)摿Α?/p>

　　2.2.2缺乏個性化服務調研發(fā)現(xiàn)，現(xiàn)有的農業(yè)休閑旅游電子商務網站普遍存在網頁宣傳以及介紹粗略、不全面的現(xiàn)象[11]。而客戶希望通過電子商務平臺了解更多、更全面的休閑農業(yè)企業(yè)的相關景點、內容和介紹。為了對消費者的需求有更深入地了解，筆者根據(jù)便利抽樣原則，從參與上海休閑農業(yè)消費的顧客群體中隨機選取了110個樣本，其中，有效樣本104個，有效樣本數(shù)占94.5%，故此樣本具有可信性。表4所示為樣本的描述性統(tǒng)計結果。由表可見，在被調查的人群中，樣本的男女比例、年齡層次合理。另外，根據(jù)筆者前期的市場調研，發(fā)現(xiàn)消費者偏好的生態(tài)游類型趨于多樣化，有80.77%的消費者偏好果蔬采摘類生態(tài)游，有44.23%的人偏好花草景觀類，60.58%的消費者偏好捕捉垂釣類，36.54%的消費者偏好景區(qū)類游玩。

　　面對我國休閑生態(tài)農業(yè)中運用互聯(lián)網+存在的各種問題，迫切需要通過以下對策來解決。

　　3.1做好切實可行的休閑生態(tài)農業(yè)電子商務的發(fā)展規(guī)劃

　　為提高各地休閑生態(tài)農業(yè)整體的互聯(lián)網+運用水平，地方政府首先應根據(jù)當?shù)貙嶋H情況，因地制宜地做好休閑生態(tài)農業(yè)電子商務的發(fā)展規(guī)劃。相關旅游管理部門以及鄉(xiāng)村政府應結合自身情況對本地區(qū)的近、中、遠期的關于休閑農業(yè)的電子商務建設模式做出切實可行的規(guī)劃;在計劃實施過程中，對問題及時反饋，以便及時調整建設方案。在此過程中，應充分發(fā)揮政府的職能，對相關從業(yè)人員做好培訓，提高他們利用互聯(lián)網的水平，以促進休閑農業(yè)的發(fā)展。

　　3.2增強信息檢索服務，提供個性化和精準化推薦

　　休閑生態(tài)農業(yè)的互聯(lián)網+運用缺乏個性化服務的一個深層次原因就在于未建立了大數(shù)據(jù)平臺，從而難以提供個性化的服務。實際上，在互聯(lián)網時代，大數(shù)據(jù)概念[13]的提出為企業(yè)提供了一條將無形數(shù)據(jù)轉化為有形資產的有力途徑�；�于大數(shù)據(jù)的電子商務是指企業(yè)利用存儲的用戶海量信息資源(即所謂的大數(shù)據(jù))，建立數(shù)據(jù)分析模型，以此實現(xiàn)對用戶需求的精準分析，從而制定滿足用戶需求的各種商務決策的活動[14]。在信息爆炸的網絡經濟時代，消費者已經難以對大量的信息資源進行高效和實時地篩選、分析。因此，開展基于大數(shù)據(jù)的電子商務應該借助于大數(shù)據(jù)技術來著重增強企業(yè)的信息檢索服務，以此幫助消費者能夠快速、準確地找到符合自身需求的產品，并通過對不同客戶購買記錄和瀏覽記錄的采集和分析，為不同種類的客戶提供個性化、精準化的產品推薦和推送服務，通過縮短消費者購買篩選的時間，提升客戶的滿意度，擴大銷售。

　　3.3雙重質檢打造可視化新模式，提升食品安全信用保障

　　隨著休閑農業(yè)電商的發(fā)展，可以預測可視農業(yè)將會成為休閑農業(yè)未來發(fā)展的一個重要方向�？梢曓r業(yè)是指利用物聯(lián)網、云計算等現(xiàn)代信息技術將農作物生長的全過程展現(xiàn)給消費者，從而增強消費者購買信心的一種現(xiàn)代農業(yè)模式�？梢曓r業(yè)可以采取國際公信度較高的農產品檢驗準則，通過互聯(lián)網平臺對農產品進行質量檢測，確保農產品的綠色、健康，實現(xiàn)線上監(jiān)督質檢產品的合格與否[15]。

　　可視化農業(yè)不僅能夠解決食品安全問題，同時還能夠解決農副產品的銷售難問題。此外，可視農業(yè)還能在農業(yè)企業(yè)在生產前就可獲得訂單，并從農產品升級中獲得溢價�？蛻粼陔娔X的一端就能看到另一端農作物的生長情況及衛(wèi)生情況，輕而易舉地就能決定是否要去某家休閑生態(tài)農業(yè)企業(yè)進行消費。與此同時，電子商務可以建立客戶信息反饋平臺，消費者可對收到的綠色產品進行實物圖片反饋，上傳出游視頻、照片等，對平臺上的服務點評打分，為其他消費者購買提供參考，真正讓消費者自己做一次質檢員，感受到自己吃到的是真正的綠色生態(tài)農產品的安全感。

　　4結語

　　隨著人們生活水平的提高，休閑生態(tài)農業(yè)旅游逐漸成為了我國人民休閑度假和娛樂的一種重要選擇�；ヂ�(lián)網+與休閑生態(tài)農業(yè)的結合相較于傳統(tǒng)休閑農業(yè)盡顯優(yōu)勢。雖然互聯(lián)網+使得休閑農業(yè)企業(yè)的發(fā)展充滿了機遇，但是，目前我國休閑農業(yè)生態(tài)模式中電子商務的運用還存在著一些問題，需要有針對性地進行解決：針對電子商務的整體水平低下的問題，要做好切實可行的休閑生態(tài)農業(yè)電子商務的發(fā)展規(guī)劃;針對休閑農業(yè)電子商務缺乏個性化服務的問題，要增強信息檢索服務，提供個性化和精準化推薦;針對農業(yè)休閑旅游電子商務食品安全網絡信用的保障度偏低的問題，要配合電子商務利用雙重質檢打造可視化新模式，提升食品安全信用保障。總之，互聯(lián)網+提供了一個平臺、一種新的手段，能否成功運用于我國休閑生態(tài)農業(yè)，關鍵在于尋找一些符合我國國情和休閑生態(tài)農業(yè)特點的盈利模式和農產品銷售新模式及新常態(tài)，圍繞特色與方向，積極嘗試互聯(lián)網+特色農業(yè)電商營運的新發(fā)展模式。

　　作者：王宇露 朱依婷 王元 張明亮 李強 單位：上海電機學院

　　《熱帶假絲酵母唑類耐藥相關基因》

　　假絲酵母(又稱念珠菌)屬引起的真菌感染在世界范圍內顯著增多，非白念珠菌(non-albicansCandida，NACA)的分離率也逐年上升[1]。幾十年來，熱帶念珠菌在不同地域的癌癥、中性粒細胞減少癥、惡性腫瘤和長期藥物治療患者中已成為排名一二的NACA[2]。研究發(fā)現(xiàn)，耐唑類藥物熱帶念珠菌的分離率呈上升趨勢[3-4]。中國侵襲性真菌耐藥監(jiān)測網(CHIF-NET)數(shù)據(jù)顯示[4]，近5年(2009年8月—2014年7月)氟康唑的耐藥率從11.2%增至42.7%，伏立康唑的耐藥率從10.4%增至39.1%;2013—2014年耐唑類藥物熱帶念珠菌的分離率呈迅速上升趨勢，且分離率上升與臨床藥物使用量無關。全球SENTRY監(jiān)測報告顯示[5]，來自31個國家(2013年)的熱帶念珠菌中，氟康唑耐藥率為11.6%，其中81.8%來自亞太地區(qū)，31.8%來自中國。

　　1靶基因ERG11過度表達和突變

　　1.1唑類藥物的作用靶酶

　　14-α去甲基化酶(14α-demethylase，14-DM)是麥角固醇合成的關鍵酶，由ERG11基因編碼合成[6]。麥角固醇是維持細胞膜正常的結構，是念珠菌細胞膜的主要固醇，可影響多種膜結合酶的功能。固醇合成階段包括形成角鯊烯、角鯊烯轉化為羊毛甾醇后生成麥角固醇，其中麥角固醇的形成是真菌合成固醇的特有階段[7]。唑類藥物與14-DM結合，阻止酶底物與14-DM結合，影響羊毛甾醇14α-甲基的羥基化反應，從而抑制真菌細胞膜中麥角固醇的生物合成，發(fā)揮抗真菌作用。

　　1.2ERG11過度表達

　　ERG11過度表達增加了細胞中靶酶的量，需更高效力的唑類藥物與靶酶結合才能達到抑菌效果[6]。研究證實，耐氟康唑熱帶念珠菌中ERG11過度表達[8-11]。Jiang等[8]研究中國52株來自臨床的熱帶念珠菌發(fā)現(xiàn)，耐唑類藥物熱帶念珠菌中ERG11平均表達水平高于敏感菌4倍以上，麥角甾醇含量增加，對氟康唑、伊曲康唑、伏立康唑均耐藥的分離株中ERG11表達水平比單獨耐氟康唑或伊曲康唑的分離株更高。

　　1.3ERG11突變

　　ERG11突變可引起其編碼的酶的活性和三維結構發(fā)生改變，降低其對唑類藥物的親和力，使藥物不能有效發(fā)揮作用[6]。臨床研究發(fā)現(xiàn)，熱帶念珠菌中越來越多的ERG11突變與唑類耐藥相關。耐唑類藥物熱帶念珠菌中，可能與耐藥相關的氨基酸置換有D81A[12]、Y132F[8-9，12-13]、S154F[7-9，12]、R245K[10]、Y221F[10]、V362I[10]、K143Q[9]、K143R[14]等。部分研究[8-9，12]發(fā)現(xiàn)Y132F和S154F在耐藥株中同時出現(xiàn)，有實驗[8]證實ERG11突變導致的Y132F和S154F置換降低了釀酒酵母對氟康唑、伊曲康唑、伏立康唑(尤其是對氟康唑和伊曲康唑)的敏感性。有研究發(fā)現(xiàn)[14-15]K143Q、K143R置換位于ERG11的唑類結合活性位點附近。根據(jù)建立的蛋白質同源性模型和Chau等[16]的研究，認為K143Q、K143R置換可能引起熱帶念珠菌對唑類藥物耐藥。

　　由于14-DM的活性位點在血紅素遠端，深埋于蛋白內部，唑類藥物需通過較長的通道才能到達[17]。三維分子建模軟件分析表明，D81A、Y132F和S154F分別位于唑類藥物進出通道的上方、通道內和通道開口，可能影響唑類藥物進入通道，導致14-DM與氟康唑的親和力下降而產生耐藥[12]。在耐唑類藥物熱帶念珠菌中發(fā)現(xiàn)的氨基酸置換，還需進一步的實驗證實和全面的流行病學研究以確定具體機制。在氟康唑劑量依賴株和氟康唑耐藥株的ERG11中也會出現(xiàn)某些沉默突變，雖不改變氨基酸序列，但可能影響蛋白與藥物相互作用位點的結構[18]。因此，熱帶念珠菌ERG11基因的沉默突變可能與耐藥有關，還須進一步研究證實。

　　2upc2基因過度表達和突變

　　2.1鋅族轉錄因子

　　Upc2pupc2基因編碼鋅族轉錄因子Upc2p，這是一種具有調控基因表達功能的蛋白，為真菌所特有。已證明，ERG11的上調和突變是熱帶念珠菌耐唑類藥物的主要機制之一[8]。Upc2p具有轉錄調節(jié)功能，可調控ERG11表達，有必要對其進一步研究。目前，對熱帶念珠菌upc2的研究較少，但越來越受重視。

　　2.2upc2基因過度表達和突變

　　Jiang等研究upc2的表達和序列改變，結果顯示31株耐唑類藥物熱帶念珠菌中upc2顯著過度表達[19]，對氟康唑、伊曲康唑、伏立康唑均耐藥的分離株中upc2表達水平比單獨氟康唑或伊曲康唑耐藥株更高。upc2啟動子區(qū)域含有T118G和G155A突變，兩種突變可同時存在(在多重耐藥分離株中始終同時存在)。他們還檢測到G392E置換，并以釀酒酵母為表達宿主，證明G392E置換可顯著降低釀酒酵母對氟康唑和伊曲康唑的敏感性。Choi等[11]對熱帶念珠菌upc2進行測序，發(fā)現(xiàn)突變基因導致的氨基酸置換，但這些突變出現(xiàn)在未過表達ERG11的氟康唑敏感菌株中，因此進一步研究upc2基因的改變對調控ERG11功能的影響很有必要。upc2過度表達和突變對ERG11的影響而導致的耐藥還需更多研究證實，未來可深入研究upc2啟動子T118G和G155A突變在熱帶念珠菌Upc2p轉錄調控ERG11中的具體作用。

　　3外排泵基因cdr1和mdr1過表達

　　3.1外排泵ABCT和MFS

　　目前認為，真菌細胞中與唑類耐藥相關的外排泵主要有兩類：一類是ATP結合盒轉運蛋白家族(ATPbindingcassettetransporter，ABCT)，為一種能量依賴型外排泵，通過水解ATP獲得能量，以主動轉運的方式增加藥物外排，從而降低細胞內藥物濃度而產生耐藥;另一類是主要易化擴散載體超家族(majorfacilitatorsuperfamily，MFS)，為非能量依賴型載體，主要依靠跨膜質子濃度差，以被動運輸?shù)姆绞较蚣毎�外泵出藥物，降低細胞內藥物濃度而產生耐藥[20]�？赡芘c熱帶念珠菌唑類耐藥相關的外排泵有：cdr1基因編碼的Cdr1p是對唑類藥物產生耐藥的最主要ABCT，mdr1編碼的Mdr1p是近年來關于唑類耐藥研究最多的MFS[20]。

　　3.2外排泵基因cdr1和mdr1過表達

　　謝宏等[20]針對藥物外排泵基因，對臨床分離的熱帶念珠菌氟康唑敏感株和耐藥株中的cdr1和mdr1表達進行研究，結果顯示兩種外排泵基因在敏感株和耐藥株中均有表達，且耐藥株中的表達高于敏感株，與文獻[10，21]報道一致。Choi等[11]分析熱帶念珠菌發(fā)現(xiàn)，mdr1和cdr1表達在氟康唑低敏感株(最低抑菌濃度1～2μg/mL)和氟康唑不敏感株(最低抑菌濃度4～64μg/mL)中均明顯高于對照組(最低抑菌濃度0.125～0.5μg/mL)。有學者在耐唑類藥物熱帶念珠菌中也觀察到ABCT上調[14]，認為外排泵基因的過度表達可能與熱帶念珠菌耐唑類藥物相關。有研究顯示，氟康唑耐藥株mdr1過表達率顯著高于敏感株，而耐藥株cdr1過表達率與敏感株無顯著統(tǒng)計學差異，表明熱帶念珠菌臨床分離株的耐藥與MFS高表達相關[9]。Jiang等[8]研究mdr1和cdr1表達時發(fā)現(xiàn)，氟康唑敏感株與耐藥株之間無顯著差異，與Vandeputte等[22]的研究結果一致。因此有學者認為，與ERG11相比，外排泵基因似乎在熱帶念珠菌耐唑類藥物中不起關鍵作用。目前為止，直接描述這些外排泵基因潛在作用的實驗尚未在熱帶念珠菌中進行，仍需進一步的實驗證實和全面的流行病學研究。

　　4其他相關基因的過度表達

　　有研究發(fā)現(xiàn)[23]，耐唑類藥物熱帶念珠菌中，sod、oat、acoat、dapaat和abat這5種基因過度表達可能是唑類耐藥的潛在新標記。5種基因編碼的酶包括涉及抗氧化防御的超氧化物歧化酶(superoxidedismutase，SOD)、鳥氨酸氨基轉移酶(ornithineaminotransferase，OAT)、乙酰鳥氨酸氨基轉移酶(acetylornithineaminotransferase，ACOAT)、腺苷甲硫氨酸-8-氨基-7-氧代壬酸氨基轉移酶(diaminopelargonicacidaminotransferase，DAPAAT)和4-氨基丁酸氨基轉移酶(4-aminobutyrateaminotransferase，ABAT)。后4種屬于磷酸吡哆醛(pyridoxalphosphate，PLP)依賴酶，在許多真菌細胞周期中發(fā)揮重要生理作用。大多數(shù)抗真菌藥物可通過在酵母細胞中產生高水平的胞內活性氧(reactiveoxygenspecies，ROS)誘導細胞死亡。SOD可催化超氧自由基向過氧化氫和二氧化碳轉化，在保護細胞免受超氧化物毒性方面發(fā)揮重要作用[24]。耐唑類藥物熱帶念珠菌中sod過度表達，可能減少ROS誘導的細胞死亡，從而使熱帶念珠菌產生耐藥。oat、acoat、dapaat和abat編碼的酶屬于PLP依賴性天冬氨酸氨基轉移酶家族，在三羧酸循環(huán)前體生成中起主要作用，其過度表達導致真菌細胞產生大量ATP。念珠菌產生耐藥的機制之一是真菌細胞膜上的ABCT通過ATP水解獲得能量，從而有效將藥物排出細胞外[25]。耐唑類藥物熱帶念珠菌中oat、acoat、dapaat和abat過度表達，產生大量ATP，有助于ABCT將細胞內藥物排除而產生耐藥。綜上所述，sod、oat、acoat、dapaat和abat過度表達可能與熱帶念珠菌耐唑類藥物有關。

　　5結語

　　熱帶念珠菌的唑類耐藥率升高給臨床治療帶來了阻力，耐藥性的形成與相關耐藥基因的過度表達和突變有一定關聯(lián)。但耐藥機制有多種，相互之間作用復雜，仍需不斷深入研究，從而為臨床提供參考和理論依據(jù)。

　　作者：唐娜 郭大文 單位：哈爾濱醫(yī)科大學附屬第一醫(yī)院檢驗科

　　推薦閱讀：《河北農業(yè)》(月刊)創(chuàng)刊于1993年，由河北省農業(yè)宣傳中心主辦。是河北省農業(yè)系統(tǒng)唯一的科普性綜合期刊。宣傳黨和政府對農業(yè)農村、農民的各項方針、政策，普及推廣農村實用科學技術，為報務“三農”做出貢獻。主要欄目：瞭望臺、政策法規(guī)、設施農業(yè)、種植參謀、良種良法、植物醫(yī)院、土肥園地、瓜果菜藥花。

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