本文摘要：摘要：建立了對貝類中撲草凈殘留的氣相色譜檢測方法，為撲草凈殘留檢測和去除方法研究提供方法支持。樣品用乙腈提
摘要：建立了對貝類中撲草凈殘留的氣相色譜檢測方法，為撲草凈殘留檢測和去除方法研究提供方法支持。樣品用乙腈提取、正己烷脫脂后再用無水硫酸鈉除水，于40 ℃下蒸餾至近干，2 mL正己烷溶解殘渣后過濾后分析。結(jié)果表明，該方法最低檢出質(zhì)量濃度為0.05 mg/kg，撲草凈在0.05～0.50 μg/mL內(nèi)線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)均大于0.99。撲草凈在幾種貝類中回收率為80%～110%，方法標(biāo)準偏差低于10%，回收率和精密度都能滿足要求。
關(guān)鍵詞：氣相色譜法;貝類;撲草凈;殘留;檢測
0 引言
撲草凈，又稱撲草凈胺，別名捕草凈、割草佳、撲蔓盡，為均三氮苯類選擇性除草劑，化學(xué)名稱為4，6 -雙異丙胺基- 2 -甲硫基- 1，3，5 -三嗪，分子式為C10H19N5S[1]，難溶于水，易溶于有機溶劑，在中性、微酸性或微堿性介質(zhì)中穩(wěn)定，遇強堿和強酸易分解。撲草凈作為除草劑不僅在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中被廣泛使用，在水產(chǎn)養(yǎng)殖中由于能夠清除魚、蝦、蟹、貝、海參等養(yǎng)殖水體中的絲狀藻類(青苔)、大型草類及有害藻類[2]，也被廣泛應(yīng)用。導(dǎo)致養(yǎng)殖水體中有撲草凈殘留，近年來我國出口水產(chǎn)品中撲草凈含量較高，海參、貝類、海帶等產(chǎn)品中都有撲草凈殘留超標(biāo)的報道，嚴重影響出口貿(mào)易和消費者健康。日本已對貝類及其產(chǎn)品中撲草凈的含量進行監(jiān)測，限量要求為10 μg/kg。目前撲草凈的檢測多采用高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法和氣相色譜質(zhì)譜法，但是質(zhì)譜價格昂貴、檢測成本高。一般實驗室會根據(jù)實驗室的條件和分析要求選擇合適的分析方法。根據(jù)撲草凈分子中含有硫元素，可用火焰光度(FPD)檢測器檢測，另外撲草凈屬于高溫易揮發(fā)化合物，所以試驗欲建立氣相色譜-FPD檢測器檢測貝類中撲草凈的檢測方法，為貝類中撲草凈的去除方法研究提供檢測方法，為水產(chǎn)品安全控制做出貢獻。
1 材料與方法
1.1 材料
市售蛤蜊、牡蠣、貽貝;娃哈哈純凈水;乙腈(色譜級);撲草凈標(biāo)準品，國家標(biāo)物中心提供;正己烷，色譜純;二氯甲烷，分析純;無水硫酸鈉，分析純。
GC2010-plus型島津氣相色譜儀;FPD檢測器(S濾光片);FA25型均質(zhì)機;RE-52A型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器，上海亞榮生化儀器廠產(chǎn)品;SHZ-D(Ⅲ)型循環(huán)水式真空泵，鞏義市予華儀器有限責(zé)任公司產(chǎn)品;湘儀L530型離心機，長沙高新技術(shù)產(chǎn)業(yè)開發(fā)區(qū)湘儀離心機儀器有限公司產(chǎn)品;2300TH型超聲波清洗器;空氣壓縮機;氫氣發(fā)生器，濟南浩偉實驗儀器有限公司產(chǎn)品;分析天平。
1.2 方法
1.2.1 標(biāo)準溶液配制
(1)標(biāo)準貯備液的配制。準確稱取50 mg撲草凈標(biāo)準品至50 mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容，制得1.0 mg/mL的標(biāo)準貯備液。
(2)標(biāo)準使用溶液的配制。從1 mg/mL的標(biāo)準貯備液中分別吸取1 mL加入到10 mL容量瓶中，用正己烷定容至刻度得100 μg/mL的標(biāo)準溶液， 1.2.2 氣相色譜條件
進樣口溫度250 ℃;色譜柱為石英毛細管柱，Rtx-5，30 m，0.25 mm ID，0.25 μm;柱溫100 ℃保持1 min，以15 ℃/min升溫至280 ℃，保持5 min;FPD檢測器(硫濾光片)溫度280 ℃;不分流進樣方式，進樣量1 μL;氣體流量：氫氣4 mL/min，空氣6 mL/min。
1.2.3 樣品處理
取樣品2 g于離心管中，加入15 mL乙腈，均質(zhì)1 min，另取離心管，其中倒入15 mL乙腈，清洗均質(zhì)機刀頭。將均質(zhì)后的樣品置于離心機中，以轉(zhuǎn)速 4 000 r/im離心5 min，用吸管將上層提取液轉(zhuǎn)移到另一支離心管中，再將剛清洗均質(zhì)機的15 mL乙腈倒入裝有樣品的離心管中，超聲振蕩2 min，再放入離心機中，以轉(zhuǎn)速4 000 r/min離心5 min，合并提取液。向裝有乙腈提取液的離心管中加入10 mL正己烷，振蕩脫脂，取下層乙腈，通過帶有無水硫酸鈉的漏斗過濾到蒸餾燒瓶中，再用10 mL乙腈清洗無水硫酸鈉和濾紙，以盡可能地回收撲草凈。將裝有乙腈提取液的蒸餾燒瓶放在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上40 ℃蒸餾至近干，向蒸餾燒瓶中加入2 mL正己烷，超聲處理1 min后，過濾后分析。
2 結(jié)果與分析
2.1 儀器分析條件確定
最初采用水產(chǎn)行業(yè)標(biāo)準SCT 9412—2014[3]水產(chǎn)養(yǎng)殖環(huán)境中撲草凈的測定方法中的條件，進樣口溫度230 ℃，柱溫100 ℃，保持1 min，以15 ℃/min升溫至240 ℃，保持20 min，檢測器溫度240 ℃。結(jié)果表明，撲草凈標(biāo)品不出峰。考慮到進樣口和檢測器溫度溫度偏低，可能是導(dǎo)致不出峰的原因。將進樣口溫度提高到250 ℃，檢測器溫度升高到280 ℃，結(jié)果撲草凈出峰，撲草凈的保留時間為10.45 min。出峰較晚。為了提高分析速度，將撲草凈出峰時間提前，將柱溫最終的240 ℃升高到280 ℃，與檢測器溫度一致。撲草凈保留時間前移至7.5 min，保留時間縮短了3 min，提高了分析效率，另外色譜柱最終溫度與檢測器溫度一致，也有利于雜質(zhì)揮發(fā)，有利于凈化色譜柱和檢測器。
升溫前撲草凈色譜圖見圖1，升溫后撲草凈色譜圖見圖2。
2.2 氣體流量的選擇
撲草凈的分子式為C10H19N5S，分子中含有硫原子，選用適合于分析含磷和硫的火焰光度檢測器(FPD)并加裝硫濾光片，由于燃燒的氫氣和空氣的流量和比例對撲草凈信號強度影響較大，所以對空氣和氫氣的流速進行優(yōu)化，根據(jù)撲草凈的信號強度選擇流速，最終確定氫氣和空氣的流速分別為氫氣 4 mL/min，空氣6 mL/min。
2.3 樣品前處理條件改進
2.3.1 樣品提取液的選擇
取3份貝類樣品，加入撲草凈標(biāo)準溶液，添加量為0.1mg/kg。依據(jù)文獻方法[3-5]，分別選擇二氯甲烷、乙腈-水(1∶4，體積比)、乙腈3種試劑作為提取液，提取貝類樣品中添加的撲草凈，依據(jù)回收率的高低選擇合適的提取液。二氯甲烷提取液提取撲草凈，回收率為41.1%，回收率低，不能滿足要求，改用乙腈-水(1/4)提取，回收率提高到64.2%，但是仍然低于70%。借鑒蔬菜水果中農(nóng)藥提取方法，改用乙腈提取，結(jié)果回收率提高到89.6%，滿足要求。
不同提取液提取蛤蜊中撲草凈的回收率見表1。
2.3.2 除水脫脂步驟的優(yōu)化
樣品用乙腈提取后，由于乙腈和水的互溶性較好，提取液中含有較多水分，不利于濃縮，所以濃縮前增加用裝有無水硫酸鈉的漏斗過濾，增加該步驟后，濃縮時間縮短，提高了樣品處理的效率。提取液除水后直接蒸餾濃縮，容易爆沸，導(dǎo)致?lián)洳輧魮p失，影響回收率，分析爆沸原因，可能提取撲草凈過程中，貝類中的脂肪也隨之進入提取液，從而導(dǎo)致濃縮時容易爆沸，所以增加了正己烷脫脂步驟，增加該步驟后爆沸次數(shù)明顯減少，有利于提取液濃縮。
2.4 方法學(xué)評價
2.4.1 線性范圍與檢出限
從100 μg/mL的撲草凈標(biāo)準溶液中分別吸取不同體積，配制成0.05，0.10，0.20，0.50 μg/mL標(biāo)準溶液，每個質(zhì)量濃度取1 μL注入氣相色譜儀進行分析。在試驗條件下，以峰面積Y為橫坐標(biāo)、質(zhì)量濃度C(μg/mL)為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準曲線，得線性回歸方程，以基線噪聲3倍峰面積對應(yīng)的質(zhì)量濃度為儀器的檢出限(RSN=3)。
撲草凈的線性回歸方程、相關(guān)系數(shù)、線性范圍和檢出限見表2。
由表2可知，撲草凈在0.05～0.5 μg/mL內(nèi)線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)都大于0.99，即在此范圍定量準確。
2.4.2 回收率與精密度
回收率和精密度是衡量方法準確度的有效指標(biāo)，為了測試方法的回收率和精密度，分別在蛤蜊、貽貝、牡蠣中進行了添加回收試驗。
貝類中撲草凈的回收率和精密度測定結(jié)果見表3。
GB/T 27404—2008[6]實驗室質(zhì)量控制規(guī)范中規(guī)定被測組分含量在0.1～10.0 mg/kg，添加回收率應(yīng)該在70%～120%，試驗中幾種貝類樣品中撲草凈回收率都在標(biāo)準規(guī)定范圍之間，相對標(biāo)準偏差RSD均小于10%，說明該方法的回收率和精密度都滿足要求，可以用于貝類中撲草凈的測定。
2.5 方法應(yīng)用
在膠州市東店子村市場、水寨市場、湖州路市場抽取蛤蜊、貽貝、牡蠣3種貝類樣品各3份，應(yīng)用文中方法檢測，其中只有水寨市場購買的蛤蜊中有0.14 mg/kg撲草凈檢出，其他樣品均未檢出撲草凈殘留。
3 結(jié)論
通過對氣相色譜條件和樣品前處理條件進行優(yōu)化，建立了氣相色譜火焰光度檢測器檢測貝類中撲草凈的檢測方法，得出最低檢出質(zhì)量濃度為0.05 mg/kg，撲草凈在0.05～0.50 μg/mL內(nèi)線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)均大于0.99。該方法可以用于貝類中撲草凈的殘留檢測。蛤蜊、貽貝、牡蠣中回收率在80%～110%，滿足要求，方法標(biāo)準偏差低于10%，精密度較高。
在膠州市東店子村市場、水寨市場、湖州路市場抽取蛤蜊、貽貝、牡蠣3種貝類樣品各3份，應(yīng)用文中方法檢測，其中只有水寨市場購買的蛤蜊中有0.14 mg/kg撲草凈檢出，其他樣品均未檢出撲草凈殘留。
參考文獻：
梁棟. 撲草凈降解菌DY-1的篩選、鑒定及特性的研 究[D]. 哈爾濱：東北農(nóng)業(yè)大學(xué)，2016.
付曉蘋，劉巧榮，許玉艷，等. 撲草凈對人體健康及水生環(huán)境的安全性評價[J]. 中國農(nóng)學(xué)通報，2015(35)：49-57.
中國水產(chǎn)科學(xué)研究院南海水產(chǎn)研究所，農(nóng)業(yè)部漁業(yè)環(huán)境及水產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢測中心(廣州). SCT 9412—2014水產(chǎn)養(yǎng)殖環(huán)境中撲草凈的測定 氣相色譜法[S]. 北京：中國標(biāo)準出版社，2014.
沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué). GB/T 18629—2002食品中撲草凈殘留量的測定方法[S]. 北京：中國標(biāo)準出版社，2002.
推薦閱讀：《山西氣象》是由山西省氣象局、山西省氣象學(xué)會主辦的學(xué)術(shù)期刊。1988年創(chuàng)刊，季刊，公開發(fā)行�？d的主要內(nèi)容包括：氣象科技有關(guān)領(lǐng)域的綜合評述及研究論文;氣象業(yè)務(wù)技術(shù)經(jīng)驗及業(yè)務(wù)現(xiàn)代化建設(shè)。
轉(zhuǎn)載請注明來自發(fā)表學(xué)術(shù)論文網(wǎng)：http:///nylw/18816.html
