HPLC法測(cè)定消毒洗手液中鄰苯基苯酚鈉的含量

　　建立了一種高效液相色譜法(HPLC)測(cè)定消毒洗手液中鄰苯基苯酚鈉含量的檢測(cè)方法。方法以體積比70∶30的甲醇-磷酸溶液(0.25mL磷酸加入到1000mL水中)為流動(dòng)相，流速1.0mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)245nm，進(jìn)樣體積10µL。結(jié)果顯示鄰苯基苯酚鈉的保留時(shí)間為7min左右，線性范圍5~100µg/mL,方法的最低檢出質(zhì)量比為2.5mg/kg，最低定量質(zhì)量比為8.5mg/kg，平均回收率為96.07%~107.06%，精密度(RSD)為0.24%~0.75%。該方法樣品處理快速簡(jiǎn)便，分析方法準(zhǔn)確可靠，適用于消毒洗手液中的鄰苯基苯酚鈉含量的測(cè)定。

　　關(guān)鍵詞：高效液相色譜法消毒洗手液鄰苯基苯酚鈉

　　鄰苯基苯酚鈉與鄰苯基苯酚均為高效低毒的廣譜殺菌劑，具有殺菌、抑霉的作用，在消毒洗手液中作為殺菌的有效成分。含有鄰苯基苯酚鈉的消毒洗手液可有效殺滅大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、白色念珠菌以及醫(yī)院感染常見細(xì)菌及病毒[1-3]。但一些動(dòng)物試驗(yàn)表明，鄰苯基苯酚鈉是一種潛在的致癌物質(zhì)，對(duì)腎臟會(huì)產(chǎn)生毒副作用，亦可能會(huì)對(duì)視覺系統(tǒng)造成潛在的損害。2017年，鄰苯基苯酚被世界衛(wèi)生組織國(guó)際癌癥研究機(jī)構(gòu)列入3類致癌物清單中。2018年4月24日，歐盟發(fā)布通報(bào)，修訂化妝品法規(guī)(EC1223/2009)，擬禁止使用鄰苯基苯酚鈉、鄰苯基苯酚鉀和鄰苯基苯酚乙醇胺鹽作為防腐劑用于化妝品中。我國(guó)《化妝品安全技術(shù)規(guī)范》(2015年版)中規(guī)定，鄰苯基苯酚及鹽類在化妝品中的使用限量為2mg/g[4]，但尚未有相關(guān)的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)及行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)來(lái)監(jiān)控消毒洗手液中鄰苯基苯酚鈉的使用。

　　因此，能夠準(zhǔn)確定量消毒洗手液中的鄰苯基苯酚鈉可為此類消毒產(chǎn)品的質(zhì)量監(jiān)控及研發(fā)提供有效依據(jù)，建立消毒洗手液中鄰苯基苯酚鈉的檢測(cè)方法非常有必要。目前鄰苯基苯酚的檢測(cè)方法有很多，主要有紫外分光光度法[5]、液相色譜法[1,6]、氣相色譜法[7]以及氣相色譜質(zhì)譜法[8]。鄰苯基苯酚鈉的檢測(cè)方法主要有氣相色譜法[3]，目前尚未查到液相色譜法。本文建立了高效液相色譜法檢測(cè)消毒洗手液中鄰苯基苯酚鈉的方法，方法以甲醇-磷酸溶液為流動(dòng)相，以245nm為檢測(cè)波長(zhǎng)。本方法的線性良好，具有較好的精密度和回收率，操作簡(jiǎn)便、分離效果好、準(zhǔn)確，可用于定性及定量分析。

　　1試驗(yàn)部分

　　1.1儀器與試劑

　　儀器：高效液相色譜Waters2695、2487紫外檢測(cè)器，美國(guó)Waters公司;XS205型電子天平，瑞士梅特勒-托利多公司;Cary100紫外分光光度計(jì)，Varian公司。試劑：鄰苯基苯酚鈉標(biāo)準(zhǔn)品，濃度83%，TCI;磷酸，色譜純，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司;甲醇，色譜純，默克股份兩合公司。流動(dòng)相：甲醇-磷酸溶液(0.25mL磷酸加入到1000mL水中)，體積比70׃30。

　　1.2色譜條件

　　ZORBAXSB-C18柱(4.6mm×250mm×5μm);柱溫30℃;流動(dòng)相A為甲醇，流動(dòng)相B為磷酸溶液(0.25mL磷酸加入到1000mL水中)，采用等度洗脫程序(A相與B相體積比為70∶30)，流動(dòng)相使用前經(jīng)0.45μm有機(jī)濾膜過(guò)濾;流速1.0mL/min;進(jìn)樣量10μL;檢測(cè)波長(zhǎng)245nm。

　　1.3標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

　　準(zhǔn)確稱取0.1g(精確到0.001g)標(biāo)準(zhǔn)品，加入8mL左右的甲醇磷酸溶液，超聲，待溶解完全后轉(zhuǎn)移至100mL容量瓶中，用甲醇磷酸溶液定容，得質(zhì)量濃度1000μg/mL的鄰苯基苯酚鈉標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液。再用移液管吸取1mL10000μg/mL標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液至10mL容量瓶中，用甲醇-磷酸溶液定容，得質(zhì)量濃度100μg/mL的鄰苯基苯酚鈉標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液。使用前配成質(zhì)量濃度分別為0、5、10、20、40、60、80和100μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)系列溶液。

　　1.4試樣處理

　　稱取試樣0.5g，精確至0.001g，置于25mL具塞比色管中，加入甲醇磷酸溶液20mL，渦旋60s，分散均勻，超聲提取15min，冷卻到室溫后，用甲醇磷酸溶液定容，渦旋振蕩搖勻，必要時(shí)離心分離�；煲航�(jīng)0.45μm有機(jī)系濾膜過(guò)濾，濾液可根據(jù)需要用甲醇磷酸溶液進(jìn)行稀釋，保存于2mL進(jìn)樣瓶中作為待測(cè)樣液，按照設(shè)定的色譜條件測(cè)定。

　　1.5結(jié)果計(jì)算

　　鄰苯基苯酚鈉的含量按式(1)計(jì)算。ω(鄰苯基苯酚鈉)=(ρ×V)×10-4/m(1)式中：ω—樣品中鄰苯基苯酚鈉的質(zhì)量分?jǐn)?shù)(%)，ρ—進(jìn)樣分析樣品溶液中鄰苯基苯酚鈉的質(zhì)量濃度(μg/mL)，V—樣品的定容體積(mL)，m—樣品質(zhì)量(g)。

　　2結(jié)果與討論

　　2.1色譜條件的優(yōu)化

　　利用紫外分光光度計(jì)，在200~800nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)全掃描。獲得鄰苯基苯酚鈉的最大吸收波長(zhǎng)為245nm，故選擇245nm作為檢測(cè)波長(zhǎng)。根據(jù)一些文獻(xiàn)報(bào)道，液相色譜檢測(cè)鄰苯基苯酚最為常用的流動(dòng)相是甲醇-水、甲醇-乙腈-水，乙腈-磷酸鹽緩沖液等。本文檢測(cè)的鄰苯基苯酚鈉，相比較鄰苯基苯酚,添加磷酸調(diào)節(jié)水相的pH,以體積比70∶30的甲醇-磷酸溶液(0.25mL磷酸加入到1000mL水中)作為流動(dòng)相時(shí)，鄰苯基苯酚鈉的出峰時(shí)間在7min左右。

　　2.2樣品定性分析

　　按照前述色譜條件，將不同劑型的消毒洗手液(表活型、皂基型)分別進(jìn)樣，每個(gè)樣品進(jìn)樣3次，記錄保留時(shí)間和峰面積。根據(jù)保留時(shí)間對(duì)樣品峰定性，標(biāo)準(zhǔn)品與樣品色譜圖，在此色譜條件下，各樣品峰峰形良好，沒有雜質(zhì)峰干擾。說(shuō)明本方法色譜條件適用于消毒洗手液中鄰苯基苯酚鈉的測(cè)定。

　　2.3線性范圍和檢出限

　　準(zhǔn)確配制0、5、10、20、40、60、80和100mg/L共6個(gè)濃度水平的鄰苯基苯酚鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液，進(jìn)樣10µL，平行測(cè)定3次，以平均峰面積對(duì)樣品質(zhì)量濃度進(jìn)行線性回歸，結(jié)果見表1。由表1可知，鄰苯基苯酚鈉的質(zhì)量濃度在5~100mg/L范圍內(nèi)，相關(guān)系數(shù)R2>0.999，標(biāo)準(zhǔn)曲線線性擬合良好。本方法以標(biāo)準(zhǔn)曲線最低點(diǎn)作為最低定量限，其三分之一作為檢出限。當(dāng)取樣量為0.5g，定容體積為25mL時(shí)，方法檢出限為0.0005μg，定量下限為0.0017μg。最低檢出質(zhì)量比為2.5mg/kg，最低定量質(zhì)量比為8.5mg/kg。

　　2.4回收率與精密度

　　向空白表活型和皂基型消毒洗手液分別添加低、中、高3種濃度水平的標(biāo)準(zhǔn)樣品，每個(gè)水平平行8份。加入鄰苯基苯酚鈉標(biāo)準(zhǔn)品后，按前述方法進(jìn)行提取，測(cè)定鄰苯基苯酚鈉含量。結(jié)果顯示，低、中、高三種濃度水平下在兩種不同劑型洗手液中的回收率都很好，鄰苯基苯酚鈉在兩種劑型洗手液中的加標(biāo)回收率范圍為96.07%~107.06%，方法的精密度(相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差，RSD)為0.30%~0.75%。結(jié)果表明，此方法具有很高的準(zhǔn)確性。

　　2.5重復(fù)性試驗(yàn)

　　分別在表活型洗手液和皂基型洗手液空白基料中加入鄰苯基苯酚鈉標(biāo)準(zhǔn)品，各配制一份樣品溶液，分別測(cè)得峰面積，然后根據(jù)回歸曲線峰面積與質(zhì)量濃度的關(guān)系式計(jì)算鄰苯基苯酚鈉的質(zhì)量濃度，重復(fù)測(cè)定6次，考察該方法的重復(fù)性，重復(fù)性試驗(yàn)的RSD值分別為0.78%和0.49%，表明該法重現(xiàn)性良好。

　　3結(jié)論

　　本文建立了一種快速、準(zhǔn)確的HPLC法測(cè)定消毒洗手液中鄰苯基苯酚鈉含量的方法。本方法回收率高，精確性強(qiáng)，檢出限低，能非常有效地對(duì)消毒洗手液中的鄰苯基苯酚鈉含量進(jìn)行監(jiān)控。

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　　醫(yī)學(xué)護(hù)理論文投稿刊物：《中國(guó)消毒學(xué)雜志》注重科學(xué)性、實(shí)用性，旨在推廣科研成果，交流工作經(jīng)驗(yàn)，促進(jìn)技術(shù)改革，發(fā)展消毒事業(yè)。以多種方式介紹國(guó)內(nèi)外有關(guān)消毒與滅菌的科研成果、工作經(jīng)驗(yàn)和理論知識(shí)。適合于廣大衛(wèi)生防疫人員和高、中級(jí)醫(yī)護(hù)人員閱讀，亦可作為從事科研、教學(xué)、食品、制藥、獸醫(yī)等工作人員的參考讀物。

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