紅細胞葉酸的微生物檢測法

　　摘要：葉酸是一種水溶性B族維生素，紅細胞葉酸與紅細胞更新過程有關(guān)，通常能準確反映一個人體內(nèi)葉酸的長期營養(yǎng)變化，是作為評價人體營養(yǎng)狀況的常用科學指標之一，用以幫助判斷各種預防性營養(yǎng)干預。目前用于檢測葉酸的檢測方法很多，其中微生物法則就是用于檢測體內(nèi)葉酸的一種經(jīng)典檢測方法，靈敏度高。這種檢測方法具有臨床操作步驟簡單、對臨床儀器設(shè)備精度要求低、成本低等幾大優(yōu)點，適用于對臨床結(jié)果分析報告，操作時間精度要求低的大中小規(guī)模臨床研究和早期臨床醫(yī)學檢測。

　　關(guān)鍵詞:紅細胞葉酸，微生物檢測方法，原理，影響

　　引言：葉酸是一種人體日常必需的一種維生素。葉酸睡眠缺乏與各種神經(jīng)疾病的早期發(fā)生頻率有關(guān)。研究結(jié)果證實，婦女在初次懷孕前或者在懷孕早期，如果缺乏葉酸激素會直接導致整個胎兒腦部神經(jīng)和血管發(fā)育缺陷。婦女在外圍孕期適當補充葉酸激素可以有效預防孕期胎兒腦部神經(jīng)和血管發(fā)育缺陷。孕期飲食補充葉酸也能幫助預防孩子出生缺陷，如先天性心臟病。此外，補充葉酸也可能有助于我們預防一些常見慢性病，如急型心血管疾病。

　　微生物論文投稿刊物：《衛(wèi)生研究》是由衛(wèi)生部主管，中國疾病預防控制中心主辦，中國疾病預防控制中心營養(yǎng)與食品安全所承辦，由深圳市疾病預防控制中心、深圳市慢性病防治中心、中國疾病預防控制中心環(huán)境與健康相關(guān)產(chǎn)品安全所和職業(yè)衛(wèi)生與中毒控制所協(xié)辦。

　　準確性地檢測人體內(nèi)葉酸營養(yǎng)水平指標是作為評價葉酸營養(yǎng)狀況和效果判斷各種預防性葉酸干預治療效果的重要基礎(chǔ)，具有重要現(xiàn)實意義。紅細胞葉酸與人體紅細胞長期代謝狀態(tài)更新過程有關(guān)，反映了葉酸在人體內(nèi)的長期不斷變化代謝狀態(tài)。近年來它被越來越多的人所使用。目前，檢測葉酸的檢測方法已經(jīng)有很多，如放射微生物法、同位素放射免疫光譜分析法、氣相色譜-離子質(zhì)譜法、離子光譜捕獲檢測法和化學發(fā)光檢測法。微生物分析法具有靈敏度高、準確度高、成本低等三大特點。它被接受并廣泛使用，作為檢測葉酸的一種標準檢測方法。本文主要重點介紹微生物分析法用于紅細胞葉酸檢測的工作原理、意義、研究進展及影響因素。

　　1微生物方法檢測葉酸的工作原理和檢測意義分析

　　1.1微生物方法檢測的工作原理

　　微生物法檢查是用于體內(nèi)葉酸檢測的一種經(jīng)典檢測方法。這種培養(yǎng)方法的工作原理主要是通過利用葉酸元素作為培養(yǎng)微生物正常生長所需中必需的一種營養(yǎng)化學物質(zhì)。在一定條件下，微生物生長的繁殖速度、與待測樣品中的葉酸含量有關(guān)。通過測量微生物增殖后的濁度并通過標準曲線計算樣品中葉酸的含量。微生物測定法對葉酸的檢測靈敏度高。本方法具有操作步驟簡單、對儀器設(shè)備要求低、成本低等優(yōu)點。然而，也存在一些不足，例如時間，其易受外源葉酸和微生物污染的影響。因此，該方法適用于大規(guī)模流行病學研究和需要較少時間報告結(jié)果的臨床試驗。

　　1.2紅細胞葉酸檢測的意義

　　紅細胞葉酸檢測的主要意義在于當葉酸檢測缺乏時，脫氧酶和胸苷酸、嘌呤酸等核苷酸結(jié)構(gòu)形式和其他氨基酸的相互作用變化被直接阻斷，細胞內(nèi)磷酸酶的合成數(shù)量減少，細胞分裂和成熟過程受阻，并可能導致巨幼體紅細胞繼發(fā)性貧血。維生素a和葉酸激素缺乏的癥狀臨床表現(xiàn)基本相似。兩者均可直接導致巨幼體白細胞減少性貧血、白細胞數(shù)量減少癥和急性血小板數(shù)量減少癥，以及引起消化道其他癥狀，如厭食、腹脹、腹瀉和舌炎，其中舌炎最為突出。舌紅、舌頭和肌肉萎縮、表面光滑，俗稱"牛舌"疼痛。維生素a和葉酸缺乏癥通常伴隨其他神經(jīng)系統(tǒng)癥狀，如乏力、手腳麻木、感覺功能障礙、運動障礙、外周炎性神經(jīng)炎、亞急性或慢性的腦脊髓后細胞變性。后者主要是可見于惡性貧血。

　　兒童和老年人患者通常可能會長期出現(xiàn)一些精神緊張癥狀，如過度嗜睡或出現(xiàn)精神錯亂。葉酸缺乏會直接引起人的情緒發(fā)生變化，補充葉酸情緒會很快消失。孕婦葉酸孕期缺乏，營養(yǎng)會大大增加一些前期疾病患者導致胎盤早剝的疾病發(fā)生率。患有巨幼兒白細胞缺陷性貧血的孕婦容易早期發(fā)生一些胎兒宮內(nèi)細胞生長遲緩、早產(chǎn)和一些新生兒會在出生期間體重低。妊娠早期葉酸營養(yǎng)缺乏也容易直接導致早期胎兒腦部神經(jīng)管發(fā)育畸形。葉酸長期缺乏會直接導致高度的同型半胱氨酸血癥，從而可能增加多種心血管疾病的病發(fā)風險。葉酸缺乏會直接干擾人體食物中大量營養(yǎng)的消化吸收和通過腸肝循環(huán)的再循環(huán)代謝過程，因此葉酸缺乏是多種小腸系統(tǒng)疾病的常見臨床并發(fā)癥。

　　2.微生物法檢測紅細胞葉酸的進展

　　傳統(tǒng)的檢測方法是用靜脈血樣品制備溶解血液，紅細胞葉酸濃度約為血清葉酸濃度的50倍，紅細胞數(shù)量因人而異，因此需要同時檢測血漿或血清葉酸和紅細胞體積，然后用校正公式計算紅細胞葉酸水平值，并且當血液樣本的體積或稀釋倍數(shù)未知時，或者當現(xiàn)場采集的血液值未知時，很難獲得準確的紅細胞葉酸結(jié)果。

　　由于紙血片標本中葉酸的制備工藝簡單，穩(wěn)定性好，該方法更適合大規(guī)模人群葉酸營養(yǎng)的流行病調(diào)查。因為溶解血液的制備需要一定的實驗室條件，所以在現(xiàn)場流行病學研究中使用這種取樣方法來評價紅細胞的葉酸水平是不方便的。然而，在采血點制備和分離血細胞是可行的。研究表明，傳統(tǒng)溶血液標本檢測的紅細胞葉酸水平與采用壓縮紅細胞之間存在顯著相關(guān)性，但后者明顯低于前者�？赡艿脑�因是當壓縮紅細胞標本用于檢測紅細胞葉酸時，需要添加外源性葉酸結(jié)合酶。

　　而微生物法檢測紅細胞葉酸要求設(shè)備操作比較簡單，易于實現(xiàn)實驗室系統(tǒng)的建立，靈敏度比較高，成本比較低，使用于大型發(fā)病人群的臨床流行病學研究。

　　3微生物檢測紅細胞葉酸中產(chǎn)生的嚴重影響及注意事項

　　3.1、患者或其他受試者

　　長期服用抗生素或使用抗惡性腫瘤治療藥物的某些患者或其他受試者會嚴重影響服用葉酸含量檢測后的結(jié)果�？股�素可以抑制體內(nèi)微生物的正常生長，導致測定值低�？股�素對血清葉酸檢測結(jié)果的干擾。在使用的時候要告訴患者在檢查前不要使用抗生素等，以消除抗生素帶來的的干擾。除了抗生素，一些抗腫瘤藥物也抑制微生物的生長，導致測定值低。

　　3.2取樣條件

　　抗凝劑通常用于血液采集，但是抗凝劑是否能抑制微生物的生長，結(jié)果是不同的。如有人認為抗凝劑能抑制微生物的生長，抗凝劑中的因素與微生物生長所必需的錳、鎂和鐵元素形成化合物，造成營養(yǎng)缺乏并影響微生物的生長。然而，一些人也認為微生物的生長不會因為使用的劑量小而被顯著抑制。

　　3.3其他影響因素

　　皂素能促進血紅蛋白中紅細胞葉酸的解離，提高紅細胞葉酸的檢測值。但其效果與酸堿度有關(guān)，當溶解血液的酸堿度為弱酸時，加入皂素對檢測結(jié)果沒有影響。當溶解血液的酸堿度為6.0-7.4時，加入皂素可以顯著提高葉酸的檢測結(jié)果。當溶解血液的酸堿度高于5.5時，電子促進紅細胞水解;當溶解血液的酸堿度低于5.時，電子反而會抑制紅血球的水解。研究發(fā)現(xiàn)，當壓縮紅細胞在-70攝氏度儲存1個月時，葉酸檢測值不受影響。此外，在制備壓縮紅細胞時，白細胞層被保留，這稍微增加了測量結(jié)果，但是沒有明顯的差異。

　　4結(jié)束語

　　綜上所述，雖然近年來出現(xiàn)了許多檢測血液中葉酸的新方法，但微生物法仍是紅細胞中葉酸的標準檢測實驗方法。該實驗方法具有設(shè)備操作簡單、易于實現(xiàn)實驗室系統(tǒng)建立、靈敏度高、成本低等幾大特點。更多的適合用于大規(guī)模發(fā)病人群的臨床流行病的研究。

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　　個人簡介：關(guān)丹丹

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