EBNA2基因在淋巴母細(xì)胞中的表達(dá)

所屬分類：醫(yī)學(xué)論文閱讀次時(shí)間：2020-06-08 15:17

本文摘要：[摘要]目的：通過檢測EBNA2在EBV轉(zhuǎn)化的淋巴母細(xì)胞的表達(dá)分析，為研究EBV相關(guān)淋巴瘤的發(fā)生發(fā)展提供相應(yīng)科研數(shù)據(jù)。方法：采用免疫組織化學(xué)法檢測EBNA2基因在EBV轉(zhuǎn)化淋巴母細(xì)胞的細(xì)胞蠟塊和正常人淋巴細(xì)胞的細(xì)胞蠟塊中的陽性結(jié)果。結(jié)果：EBNA-2在轉(zhuǎn)化淋巴母細(xì)胞

高端學(xué)術(shù)服務(wù)項(xiàng)目

　　[摘要]目的：通過檢測EBNA2在EBV轉(zhuǎn)化的淋巴母細(xì)胞的表達(dá)分析，為研究EBV相關(guān)淋巴瘤的發(fā)生發(fā)展提供相應(yīng)科研數(shù)據(jù)。方法：采用免疫組織化學(xué)法檢測EBNA2基因在EBV轉(zhuǎn)化淋巴母細(xì)胞的細(xì)胞蠟塊和正常人淋巴細(xì)胞的細(xì)胞蠟塊中的陽性結(jié)果。結(jié)果：EBNA-2在轉(zhuǎn)化淋巴母細(xì)胞的細(xì)胞蠟塊中呈現(xiàn)棕褐色顆粒的陽性表達(dá)，而在正常淋巴細(xì)胞細(xì)胞蠟塊中不表達(dá)。結(jié)論：EBNA2在EBV轉(zhuǎn)化的永生化淋巴細(xì)胞的細(xì)胞蠟塊中表達(dá)，我們推斷EBNA2在EB病毒相關(guān)惡性淋巴瘤的形成過程中可能起了某些促進(jìn)作用。

　　關(guān)鍵詞：EB病毒(EBV);EB病毒核抗原-2(EBNA2);淋巴瘤

現(xiàn)代免疫學(xué)

　　EB病毒(Epstein-Barrvirus,EBV)是一種嗜人類淋巴細(xì)胞的雙鏈γ-DNA皰疹病毒[1]，研究發(fā)現(xiàn)大部分的成年人均感染過EB病毒，多表現(xiàn)為B淋巴細(xì)胞終身攜帶無癥狀感染。EB病毒潛伏感染狀態(tài)通常表達(dá)為三個(gè)潛伏膜蛋白和六個(gè)核蛋白[2]，其中EBNA-2是EB病毒在感染宿主細(xì)胞后最早表達(dá)的病毒基因產(chǎn)物之一，本實(shí)驗(yàn)在體外培養(yǎng)建立EBV轉(zhuǎn)化的淋巴細(xì)胞，采用免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測EBNA2在EB病毒轉(zhuǎn)化淋巴母細(xì)胞的細(xì)胞蠟塊和正常淋巴細(xì)胞以中的陽性表達(dá)情況，來推測和研究分析EBNA2在EB病毒相關(guān)淋巴瘤中的作用以及影響。

　　材料與方法

　　1.1獲取轉(zhuǎn)化淋巴細(xì)胞采取饑餓法將B95-8細(xì)胞放置7天至9天，然后收集培養(yǎng)液，1000轉(zhuǎn)/分鐘速度離心后棄掉上清，從而得到EB病毒的懸浮液。再進(jìn)行分離全血淋巴細(xì)胞，取EB病毒重懸淋巴細(xì)胞，在培養(yǎng)箱培育。獲得細(xì)胞聚集成團(tuán)生長的EB病毒轉(zhuǎn)化淋巴母細(xì)胞，鏡下觀察轉(zhuǎn)化的淋巴母細(xì)胞體積比正常淋巴細(xì)胞體積明顯增大[2]。

　　1.2免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測EBNA2的陽性表達(dá)情況

　　收集大量培養(yǎng)的細(xì)胞，轉(zhuǎn)移至離心管，以2000/分鐘的離心速度離心5-6分鐘，并且重復(fù)離心三次。棄上清，將沉淀物轉(zhuǎn)移至載玻片，將細(xì)胞集中在載玻片中央?yún)^(qū)域。將載玻片輕輕放入95%酒精快速固定30秒，再將載玻片浸入10%中性緩沖福爾馬林，固定1-2小時(shí)。收集載玻片上的沉積物放入包埋盒包埋，浸入緩沖福爾馬林中固定3-5小時(shí),常規(guī)脫水制片。常規(guī)微波抗原修復(fù)，PBS清洗，封閉，滴加一抗于4℃孵育并過夜，滴加二抗，PBS清洗3次，再DAB顯色復(fù)染，封片后顯微鏡觀察。

　　1.3結(jié)果

　　EBNA-2陽性顆粒為棕褐色，定位于細(xì)胞漿或細(xì)胞核。EBNA-2在轉(zhuǎn)化細(xì)胞的細(xì)胞蠟塊中表達(dá)陽性棕黃色顆粒，而在正常淋巴細(xì)胞細(xì)胞蠟塊中不顯色。

　　3.討論

　　淋巴瘤的發(fā)生發(fā)病率呈上升趨勢，因此淋巴瘤是目前國內(nèi)外學(xué)者研究的熱點(diǎn)之一，淋巴瘤是一種起源于淋巴造血系統(tǒng)的腫瘤，一般可分為霍奇金淋巴瘤和非霍奇金淋巴瘤[3]�；羝娼鹆馨土鰹榱鼋M織內(nèi)含有淋巴細(xì)胞和漿細(xì)胞以及特征性的里-斯細(xì)胞，霍奇金淋巴瘤可以分為經(jīng)典型和結(jié)節(jié)性富含淋巴細(xì)胞型，非霍奇金淋巴瘤在病理學(xué)研究發(fā)現(xiàn)有異常增生的的淋巴細(xì)胞和網(wǎng)狀細(xì)胞等多種細(xì)胞[4]。根據(jù)不同的淋巴細(xì)胞，還可以將淋巴瘤分為NK細(xì)胞、T細(xì)胞和B細(xì)胞淋巴瘤[5]。目前淋巴瘤的發(fā)生發(fā)展機(jī)制尚不明確，本實(shí)驗(yàn)通過免疫組織化學(xué)法檢測EBNA2基因在EBV轉(zhuǎn)化淋巴母細(xì)胞和正常人淋巴細(xì)胞和中的陽性結(jié)果，以探討EBNA2在EB病毒相關(guān)淋巴瘤中的作用以及影響。

　　EB病毒是一種皰疹病毒，有研究表明EB病毒參與淋巴瘤的發(fā)生和進(jìn)展，EBV其實(shí)作為外源性感染因子，可以逃避宿主細(xì)胞的免疫監(jiān)視，在宿主細(xì)胞內(nèi)長期生存，EBV的感染狀態(tài)是以表達(dá)一系列EBV潛伏感染蛋白[2]，其中EBNA-2作為EBV感染宿主最先表達(dá)的病毒蛋白之一，參與EBV游離基因的復(fù)制從而調(diào)控EB病毒的轉(zhuǎn)錄[4]，導(dǎo)致淋巴細(xì)胞持續(xù)增生。

　　EBNA2在淋巴細(xì)胞永生化過程中起重要作用的另一個(gè)原因可能是因?yàn)榻獬藢Ψ磻?yīng)啟動(dòng)子轉(zhuǎn)錄的某些抑制，從而激活相關(guān)信號通路來反式激活下游的病毒靶基因。但EBNA-2在淋巴細(xì)胞到惡性淋巴瘤的轉(zhuǎn)化過程的具體作用仍不清楚，因此本實(shí)驗(yàn)通過免疫組織化學(xué)法檢測EBNA2基因在EBV轉(zhuǎn)化淋巴母細(xì)胞和正常人淋巴細(xì)胞和中的陽性結(jié)果，以求提供EBNA2基因在EBV轉(zhuǎn)化淋巴母細(xì)胞以及淋巴瘤的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)和依據(jù)。

　　EBNA2與細(xì)胞因子結(jié)合后，能夠激活病毒的其它潛伏期基因，促進(jìn)有利細(xì)胞不典型增殖的基因陽性表達(dá)，從而顯著提高B細(xì)胞活化標(biāo)志物的表達(dá)，同時(shí)還能激活原癌基因c-myc和c-fgr可能促進(jìn)了細(xì)胞的惡性轉(zhuǎn)化[7]，EBNA-2在轉(zhuǎn)化淋巴母細(xì)胞的細(xì)胞蠟塊中呈現(xiàn)棕褐色顆粒的陽性表達(dá)，而在正常淋巴細(xì)胞細(xì)胞蠟塊中不顯色與該觀點(diǎn)相一致。

　　國外學(xué)者實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)EBNA-2也可激活某些信號通路，來促使和增加淋巴細(xì)胞的的不典型增生[9]，本實(shí)驗(yàn)EBNA-2在轉(zhuǎn)化淋巴母細(xì)胞的細(xì)胞蠟塊中呈現(xiàn)棕褐色顆粒的陽性表達(dá)，而在正常淋巴細(xì)胞細(xì)胞蠟塊中不顯色，與該觀點(diǎn)相符。因此表明EBNA-2可能在淋巴細(xì)胞到惡性淋巴瘤的轉(zhuǎn)化過程起到了某些促進(jìn)作用。

　　結(jié)論：本實(shí)驗(yàn)EBNA-2在轉(zhuǎn)化淋巴母細(xì)胞的細(xì)胞蠟塊中呈現(xiàn)棕褐色顆粒的陽性表達(dá)，而在正常淋巴細(xì)胞細(xì)胞蠟塊中不顯色，因此我們大膽推測EBNA-2可能在淋巴細(xì)胞到惡性淋巴瘤的轉(zhuǎn)化過程起到了某些促進(jìn)作用，可能是EB病毒相關(guān)淋巴瘤的致病因素之一，但EBNA-2在淋巴細(xì)胞到惡性淋巴瘤的轉(zhuǎn)化過程的具體作用仍值得我們?nèi)パ芯亢吞剿鳌?/p>

　　參考文獻(xiàn)：

　　[1]王露,劉卓然.EB病毒感染相關(guān)外泌體的研究進(jìn)展[J].微生物學(xué)免疫學(xué)進(jìn)展,2018,46(04):63-68.

　　[2]羅春艷,謝曉利,張楊,王湘屏,賀榮芳,唐運(yùn)蓮,甘潤良.EB病毒轉(zhuǎn)化淋巴母細(xì)胞LMP-1,LMP-2A及LMP-2B的表達(dá)[J].免疫學(xué)雜志,2011,27(08):734-736.

　　[3]蘇鵬飛.放化療聯(lián)合手術(shù)治療原發(fā)性胸腺淋巴瘤的臨床效果研究[J].中國實(shí)驗(yàn)血液學(xué)雜志,2015,23(01):123-126.

　　[4]劉艷輝,莊恒國,林漢良,吳秋良,羅東蘭,駱新蘭.富于T細(xì)胞/組織細(xì)胞的B細(xì)胞淋巴瘤病理形態(tài)、免疫表型及鑒別診斷[J].中華病理學(xué)雜志,2005(12):771-775.

　　[5]陳燕,袁凱鋒,李曉明,邢宏運(yùn),吳鵬強(qiáng),馬濤.妊娠合并ALK陽性間變性大細(xì)胞淋巴瘤1例并文獻(xiàn)復(fù)習(xí)[J].重慶醫(yī)學(xué),2017,46(07):1005-1006.

　　作者簡介：路素麗

　　醫(yī)學(xué)論文投稿刊物：《現(xiàn)代免疫學(xué)》是中國科學(xué)引文數(shù)據(jù)庫來源期刊及統(tǒng)計(jì)源期刊，是中國自然科學(xué)核心期刊，也是基礎(chǔ)類醫(yī)學(xué)核心期刊之一。以服務(wù)全國為宗旨，主要報(bào)道我國免疫學(xué)研究成果，旨在促進(jìn)國內(nèi)外學(xué)術(shù)交流，刊載內(nèi)容有基礎(chǔ)免疫學(xué)、臨床免疫學(xué)和免疫學(xué)技術(shù)等。