本文摘要：摘 要:目的 觀察復方中藥佳蓉片(JRP)與乙烯雌酚(DES)對生殖系統(tǒng)的不同作用. 方法 用JRP低(JRP-L，6g kg-1 )、JRP中(JRP-M，12g kg-1 )、JRP高(JRP-H，24g kg-1 )三個不同劑量、DES(0.17mg kg-1 )和生理鹽水(Con-trol0.5mL)每日分別灌胃處理70只未成年(17d)昆
摘 要:目的 觀察復方中藥佳蓉片(JRP)與乙烯雌酚(DES)對生殖系統(tǒng)的不同作用. 方法 用JRP低(JRP-L，6g kg-1 )、JRP中(JRP-M，12g kg-1 )、JRP高(JRP-H，24g kg-1 )三個不同劑量、DES(0.17mg kg-1 )和生理鹽水(Con-trol0.5mL)每日分別灌胃處理70只未成年(17d)昆明小鼠3d和50只去卵巢成年(60d)昆明小鼠28d，成年小鼠實驗中另設灌服生理鹽水的假去卵巢組(Sham)和去卵巢組(OVX)，觀察對子宮質量/體質量百分比(PUM)、陰道上皮細胞角化百分比(VKEC)、血清17β雌二素(E2)水平的變化. 結果 (1)PUM值JRP不同劑量處理未成年小鼠3d后，JRP-M組的PUM值高于Control組(12.52.3，vs8.21.4，P<0.01)，但明顯低于DES組(37.03.8，P<0.01).JRP處理成年去卵巢小鼠28d后，OVX+JRP三個組的PUM值顯著高于OVX組(分別為10.91.9，11.33.3，14.67.8，vs8.41.4，P<0.05)，但明顯低于OVX+DES組(29.511.7，P<0.01)和Sham組(33.612.1P<0.01);(2)VKEC值OVX+JRP三個不同劑量組的VKEC值與OVX比較明顯增加(分別為7.12.5，11.03.5，9.45.4，vs1.80.8，P<0.05)，但增加值顯著低于DES組(5.71.4，P<0.05);(3)血清E2值OVX+JRP組和OVX+DES組的血清E2水平與OVX組比較無差異. 結論 JRP對小鼠子宮、陰道有弱雌激素樣作用，但作用強度遠低于DES，這種作用可能不是通過提高內源性E2水平而實現(xiàn)的.
關鍵詞: 中成藥;卵巢切除術;子宮;小鼠;陰道
0 引言
激素替代治療在治療更年期綜合征，預防絕經后骨質疏松和心血管疾病等方面有很好的療效，但用藥后患者陰道不規(guī)則出血、增加患子宮內膜癌和乳腺癌的危險等副作用，使激素替代治療的可接受性較差[1-3] .研究發(fā)現(xiàn)中藥佳蓉片(JRP)對治療更年期綜合征，防治骨質疏松等疾患有很好的療效，其臨床效果與雌激素相似[4，5] .但JRP是否也具有雌激素樣的作用，特別是對生殖系統(tǒng)的副作用值得研究.我們通過觀察藥物對未成年和成年卵巢摘除小鼠子宮體質量百分比、陰道細胞涂片和血清雌激素等變化，比較了JRP與合成雌激素乙烯雌酚(diethyl-stilbestrol，DES)對生殖器官的雌激素樣作用.
1 材料和方法
1.1 實驗藥品
DES(diethylstilbestrol)購自Sigma公司.JRP(由西安博愛制藥廠提供)每片含生藥1.0g，臨用前用生理鹽水配制成所需濃度的混懸液.
1.2 動物飼養(yǎng)條件
雌性昆明小鼠購于本校實驗動物中心，飼養(yǎng)溫度22℃，12h光照，12h黑暗，容許自由飲水及攝食.未成年雌性昆明小鼠70只，出生后17d，體質量(15±2)g.隨機分為7組，每組10只，立即開始實驗.成年雌性昆明小鼠50只，出生后60d，體質量(37±2)g，隨機分為5組，每組10只，適應性飼養(yǎng)5d后開始實驗.
1.3 未成年雌性小鼠實驗
分組及用藥劑量:對照組(control，生理鹽水0.5mL d-1 )，DES組(0.17mg kg-1 )，JRP組根據(jù)劑量又分為JRP-L(6g kg-1 )，JRP-M(12g kg-1 )，JRP-H(24g kg
-1 )等3個組，共處理3d.
1.4 成年雌性小鼠實驗
1.4.1 模型復制及分組處理
�、倌Ｐ蛷椭�:全部動物在戊巴比妥鈉(10g L-1 )麻醉下行手術.假手術組僅在開腹后去除卵巢周圍的脂肪組織后關腹;其余各組去除雙側卵巢.術后連續(xù)觀察陰道涂片4d，去卵巢后小鼠表現(xiàn)為動情間期表現(xiàn)，證實手術成功;②分組處理:根據(jù)每日藥物處理劑量分為4組:OVX組(生理鹽水0.5mL d-1 )，假手術組(Sham，生理鹽水0.5mL d-1 )，OVX+DES組(0.17mg kg-1 )和OVX+JRP組.JRP根據(jù)處理劑量不同又分為JRP-L(6g kg-1 )、JRP-M(12g kg-1 )、JRP-H(24g kg-1 )等3組.術后第5d開始藥物灌胃，每只0.5mL，每日1次，連續(xù)28d.
1.4.2 陰道細胞涂片
成年小鼠灌胃第14日開始進行陰道涂片觀察:以左手背位固定小鼠，右手取一預先吸有生理鹽水0.1～0.2mL的鈍頭吸管，小心插入小鼠陰道內2～3cm反復抽吸2～3次，吸出1滴液體于載玻片上，均勻涂開，放入950mL L-1 乙醇中固定15min，取出晾干，用伊紅(5g L-1 )染色，顯微鏡下觀察并記數(shù)陰道上皮角化細胞(VKEC)百分率，每日涂片1次，連續(xù)觀察7d.
1.5 動物處理
未成年和成年小鼠均在最后一次喂藥后24h稱體質量，眼球取血0.8mL，然后以頸椎脫臼處死動物，剖腹取出子宮，迅速用電子天平稱子宮濕質量，計算子宮質量百分比(PUM，%).成年小鼠的血清17β雌二醇水平(E2)用放射免疫法測定.統(tǒng)計學方法:數(shù)據(jù)采用x ±s表示，用t檢驗比較組間差異.
2 結果
2.1 JRP對未成熟小鼠體質量和子宮濕質量的影響
與對照組比較，未成年雌性小鼠在JRP3個不同劑量組灌胃處理3d后，體質量增加值和子宮濕質量與對照組比較有顯著差異(P<0.01)，但增加值顯著低于DES組(P<0.01).JRP-M組處理3d后，小鼠體質量和子宮濕質量較其它各JRP組增加明顯(P<0.01，Tab1). 表1 佳蓉片和雌激素對未成熟雌性小鼠子宮及體質量的影響(略)
2.2 JRP對成年去卵巢小鼠的影響
去卵巢4wk后，OVX組的PUM明顯低于Sham組(P<0.01);DES組的PUM與Sham組無顯著差異;與OVX對照組比較，JRP-L，JRP-M，JRP-H3個組的PUM增加(P<0.05)，但顯著低于Sham組與OVX+DES組(P<0.05).小鼠去卵巢后，陰道細胞學檢查無動情周期的變化，角化細胞數(shù)量極少;OVX+DES的角化細胞數(shù)量顯著上升，與OVX對照組有顯著的差異(P<0.05);JRP各組的陰道角化細胞數(shù)量與OVX組相比較有顯著性增加，但遠低于OVX+DES組.OVX小鼠血清雌激素水平降低，與Sham組有顯著差異(P<0.01)，JRP-L，JRP-M，JRP-H和OVX+DES與OVX組的血清E2水平相似(Tab2).表2 佳蓉片對去卵巢小鼠子宮質量百分比、陰道角化上皮細胞、血清E2水平的影響(略)
3 討論
更年期綜合征和絕經相關疾病的發(fā)生與更年期婦女卵巢功能低下、雌激素水平降低密切相關.隨著人口老齡化社會的到來，更年期綜合征及相關疾病的患者越來越多，由此而引起的家庭和社會雙重負擔日益加重.目前，激素替代治療是防治絕經期綜合征及絕經相關疾病的主要措施，但長期應用有增加子宮內膜癌和乳腺癌發(fā)病率的危險，使絕經后婦女對應用激素替代治療的順從性不高[6-10] .因此，尋求 副作用小的更有效的治療方法具有十分重要的意義.我們多年的臨床實踐和基礎研究證明，主要成分為倒卵五葉加、熟地黃、菟絲子、肉蓯蓉、女貞子補腎中藥復方JRP具有補腎、滋陰壯陽和扶正固本的功效，對更年期綜合征及絕經后骨質疏松等有很好的療效，臨床效果與雌激素類似[4，5] .現(xiàn)代研究表明，部分植物藥材中包含一類具有雌激素活性的化學物質，統(tǒng)稱為植物雌激素(phytoestrogens)，它們的結構可能與雌激素相似，可能存在與雌激素受體結合的基團，也可能以其他方式與機體作用而表現(xiàn)為雌激素樣效應[11，12] .植物雌激素有防治絕經期綜合征，絕經后骨質疏松的功效[7-11] ，而無刺激子宮內膜和乳腺增生的副作用.有學者[13-15] 提出植物雌激素可作為激素替代治療的選擇之一.植物雌激素的深入研究為補腎中藥防治絕經相關疾病提供了強有力的證據(jù).有關JRP作用機制的研究也表明，JRP對神經遞質和性腺軸激素的調節(jié)作用[4，5] 與雌激素作用類似.因此，證實JRP是否具有雌激素樣作用及對生殖系統(tǒng)的副作用是本實驗的重點研究內容.
未成熟雌性小鼠是公認的研究外源性雌激素對生殖器官作用的理想模型，采用子宮濕質量與體質量之比的百分數(shù)作為評價雌激素活性指標.該法簡便快速，靈敏度高，植物藥中的多種化學結構經體內轉化后才有雌激素活性的物質和中間代謝產物特別適用于本方法檢測.本實驗中，用合成雌激素DES處理未成熟小鼠3d后體質量和子宮濕質量顯著增加，子宮體質量百分比值升高，證實了本模型的可靠性.JRP3個不同劑量組處理未成年小鼠3d后，子宮體和體質量顯著高于對照組.使去卵巢小鼠子宮體質量百分比值顯著增加，并成劑量依賴性關系.結果提示中藥JRP有促進機體合成代謝和弱雌激素樣作用.去卵巢小鼠的陰道細胞涂片可作為檢測植物雌激素活性的敏感指標.有正常動情周期的小鼠摘除卵巢后，陰道上皮角化細胞率明顯減少至1.8%，而用DES后陰道上皮細胞率值達到95.7%.在本實驗中，JRP3個劑量組的陰道細胞涂片中角化細胞數(shù)量明顯高于對照組，但遠遠低于DES組對陰道上皮細胞的影響，JRP的作用僅為DES的九分之一.血清雌激素水平測定發(fā)現(xiàn)，去卵巢小鼠雌激素水平低落，用JRP后雌激素水平無明顯變化，間接提示JRP弱雌激素樣作用并不是通過提高內源性雌激素水平而實現(xiàn)的.近年來的研究提示部分中藥，包括佳蓉片組方中的中藥含有植物雌激素，JRP的弱雌激素樣活性有可能是JRP組方中的植物雌激素發(fā)揮的作用，這也為JRP治療更年期綜合征，絕經后骨質疏松等疾病，提供了藥理學證據(jù).中藥的藥理作用表現(xiàn)為多靶點、多途徑的綜合效應，這與中藥，特別是中藥復方中含有眾多的化學物質有關.我們的研究僅從一個側面，一個角度探討了JRP與雌激素作用的差異，補腎中藥的復雜作用機理還有待于進一步研究.
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