本文摘要：本篇文章是由 《中國(guó)實(shí)用外科》 發(fā)表的優(yōu)秀醫(yī)學(xué)論文，中國(guó)實(shí)用外科雜志于1981年創(chuàng)刊，當(dāng)年出版6期，1985年改為月刊。1994年被衛(wèi)生部接納，并報(bào)請(qǐng)中國(guó)科學(xué)技術(shù)委員會(huì)批準(zhǔn)，由《實(shí)用外科雜志》更名為《中國(guó)實(shí)用外科雜志》。由中國(guó)醫(yī)師協(xié)會(huì)、中國(guó)實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志社
本篇文章是由《中國(guó)實(shí)用外科》發(fā)表的優(yōu)秀醫(yī)學(xué)論文，中國(guó)實(shí)用外科雜志于1981年創(chuàng)刊，當(dāng)年出版6期，1985年改為月刊。1994年被衛(wèi)生部接納，并報(bào)請(qǐng)中國(guó)科學(xué)技術(shù)委員會(huì)批準(zhǔn)，由《實(shí)用外科雜志》更名為《中國(guó)實(shí)用外科雜志》。由中國(guó)醫(yī)師協(xié)會(huì)、中國(guó)實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志社主辦。編委會(huì)由全國(guó)31個(gè)省(直轄市)、自治區(qū)、特別行政區(qū)的二百多位有影響的專(zhuān)家組成，以指導(dǎo)和協(xié)助編委會(huì)工作。
【摘 要】目的 總結(jié)網(wǎng)狀纖維染色在病理工作應(yīng)用中的體會(huì)。方法 取活體組織檢查標(biāo)本進(jìn)行網(wǎng)狀纖維染色。結(jié)果 注意Gomori氏銀氨液的配制質(zhì)量、染色時(shí)間、氯化金調(diào)色時(shí)間的控制等等可使網(wǎng)狀纖維染色達(dá)到理想效果。結(jié)論 注意網(wǎng)狀纖維染色過(guò)程的各個(gè)操作環(huán)節(jié)、可使染色達(dá)到滿(mǎn)意效果，在病理診斷中具有積極的意義。
【關(guān)鍵詞】網(wǎng)狀纖維染色 應(yīng)用
網(wǎng)狀纖維是網(wǎng)狀結(jié)締組織內(nèi)的一種纖維，由網(wǎng)狀細(xì)胞產(chǎn)生，纖維細(xì)而有分支，穿行于網(wǎng)狀細(xì)胞體和突之間，交錯(cuò)排列成致密的網(wǎng)狀，故稱(chēng)之。此種纖維用H.E染色一般不易分辨，若用銀氨溶液浸染能使纖維變成黑色，故又稱(chēng)嗜銀纖維。網(wǎng)狀纖維多分布在結(jié)締組織與其他組織交界處，如基膜的網(wǎng)板、腎小管周?chē)�、毛�?xì)血管周?chē)鹊取Ｔ谠煅鞴俸蛢?nèi)分泌腺，有較多的網(wǎng)狀纖維構(gòu)成它們的支架，所以網(wǎng)狀纖維染色應(yīng)用非常廣泛。常用于顯示和鑒別腫瘤的性質(zhì)和來(lái)源，如癌和肉瘤、血管內(nèi)皮瘤和血管外皮瘤等，也可用于觀察和研究癌組織的發(fā)生、發(fā)展及惡性程度;顯示與觀察基底膜的變化，從而有效地判斷其上皮來(lái)源，且有助于區(qū)分不同來(lái)源的上皮腫瘤;還可用于識(shí)別壞死組織的結(jié)構(gòu)及類(lèi)型等等。因此，作為常規(guī)染色的必要補(bǔ)充，網(wǎng)狀纖維染色在病理診斷中起到重要的輔助作用，是病理染色技術(shù)不可缺少的組成部分。網(wǎng)狀纖維染色方法較多，其中最常用的是Gomori法[1]，筆者就工作中積累的經(jīng)驗(yàn)和體會(huì)總結(jié)如下。
1 資料和方法
1.1 材料 選自本院病理科活體組織檢查標(biāo)本，中性福爾馬林固定，石蠟包埋。
1.2 試劑配制 Gomori銀氨液：取10%硝酸銀4滴盛入小量杯中，加入1滴10%氫氧化鈉，即產(chǎn)生灰黑色沉淀;記錄總量，加蒸餾水洗滌沉淀物，傾去上清液，再加入蒸餾水，反復(fù)3次，最后加蒸餾水，湊足總量，然后逐滴加濃氨水并不斷搖晃，使混合均勻;至沉淀剛好溶解，加入10%硝酸銀至沉淀再次生成，再滴入1滴至數(shù)滴的濃氨水，觀察沉淀物將溶盡，尚留數(shù)個(gè)小顆粒時(shí)停止，加蒸餾水3倍后裝入棕色玻璃瓶，密封避光保存?zhèn)溆谩?/p>
1.3 方法[2] ①常規(guī)石蠟切片，脫蠟至水。②入0.25%高錳酸鉀5分鐘，自來(lái)水洗。③2%草酸漂白，自來(lái)水洗，蒸餾水洗。④2%硫酸鐵銨媒染1分鐘，細(xì)水速洗。⑤入Gomori銀氨液1分鐘(加蓋進(jìn)行)，蒸餾水洗。⑥20%的甲醛溶液還原1分鐘，蒸餾水洗。⑦0.2%氯化金液鏡下觀察調(diào)色1-2分鐘，蒸餾水洗。⑧2%硫代硫酸鈉固定1分鐘，蒸餾水洗，V.G液復(fù)染3分鐘。⑨無(wú)水乙醇脫水，二甲苯透明，中性樹(shù)膠封固。
2 結(jié)果
網(wǎng)狀纖維呈黑色，膠原纖維呈紅色，背景呈黃色。
3 討論
網(wǎng)狀纖維染色中，高錳酸鉀的作用是氧化，使網(wǎng)狀纖維具有選擇性，染色力增強(qiáng)，同時(shí)改善背景色調(diào)，減弱銀氨液對(duì)胞核的著染，有利于胞核的復(fù)染。不經(jīng)氧化的切片，網(wǎng)狀纖維不能很好地顯示出來(lái)，故高錳酸鉀存放時(shí)間不能過(guò)長(zhǎng)，以免失去氧化作用。網(wǎng)狀纖維是由含有糖蛋白的膠原蛋白組成，易與氨性銀結(jié)合，即帶正電荷的二氨合銀離子被具有嗜銀性物質(zhì)的網(wǎng)狀纖維吸附，再經(jīng)甲醛還原成棕黑色金屬銀，從而使網(wǎng)狀纖維顯色。因此為了得到滿(mǎn)意而穩(wěn)定的染色結(jié)果，銀氨液的配制是關(guān)鍵，配制時(shí)滴入氨水的量要恰當(dāng)，過(guò)多感應(yīng)下降會(huì)使液體過(guò)堿，滴染使切片容易脫落，過(guò)少則感應(yīng)上升，浸染效果不好。由于配好的銀氨液很敏感，受光或空氣中的氧的作用后均易解離出銀鹽，故宜用棕色玻璃瓶密封避光保存于4℃冰箱中，不能使用金屬器皿，如現(xiàn)用現(xiàn)配則效果更佳。銀氨液滴染水洗時(shí)間也要恰當(dāng)，采用傾斜流水速洗，否則會(huì)產(chǎn)生銀顆粒沉淀，水洗時(shí)間過(guò)長(zhǎng)則影響還原，甲醛是還原劑，能把與網(wǎng)狀纖維的銀氨化合物還原成棕黑色的金屬銀，因此20%甲醛液應(yīng)經(jīng)常更換。用0.2%氯化金調(diào)色須鏡下控制，如時(shí)間短，會(huì)增加背景染色;時(shí)間長(zhǎng)，則會(huì)使網(wǎng)狀纖維顏色變淺。網(wǎng)狀纖維具有嗜銀性，而膠原纖維結(jié)構(gòu)疏松，寬孔粗纖維能與酸性染料結(jié)合[3]，在通常情況下為鑒別診斷和研究應(yīng)用需要，同時(shí)再進(jìn)行膠原纖維對(duì)比染色，可使色彩分辨更為鮮明、清晰，從而得到鑒別診斷的滿(mǎn)意結(jié)果。
在病理診斷及鑒別診斷過(guò)程中，HE切片的光鏡觀察是病理診斷的基礎(chǔ)，也是最基本的最主要的手段，但單純用HE染色有時(shí)很難判別其病因、組織來(lái)源及發(fā)病機(jī)制等方面問(wèn)題，故常需借助其他輔助手段來(lái)補(bǔ)充，比如特殊染色、免疫組化染色、電鏡及原位雜交等方法。從而使病理診斷的準(zhǔn)確性不斷得到提高，有時(shí)這些方法在鑒別診斷上能起決定性作用，其中特染是專(zhuān)門(mén)用于顯示某些特定目的物的染色方法，是病理診斷及科學(xué)研究領(lǐng)域不可缺少的組成部分。而網(wǎng)狀纖維染色在病理工作中是最常用的特殊染色法，由于網(wǎng)狀纖維分布極為廣泛，多種疾病的病變均會(huì)影響網(wǎng)狀纖維，所以網(wǎng)狀纖維染色的結(jié)果對(duì)病理診斷起到很大作用。
參 考 文 獻(xiàn)
[1]龔志錦，詹镕洲.病理組織制片和染色技術(shù).上海：上�？茖W(xué)技術(shù)出版社，1994:70-80.
[2]中華醫(yī)學(xué)會(huì).臨床技術(shù)操作規(guī)范.病理學(xué)分冊(cè).北京：人民出版社，2004：134-135.
[3]全國(guó)衛(wèi)生專(zhuān)業(yè)技術(shù)資格考試專(zhuān)家委員會(huì)，病理學(xué)技術(shù).北京：人民衛(wèi)生出版社，2009:441.
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