中醫(yī)濕證動物模型的研究進展

　　摘要：濕，屬六氣之一。濕證是指具有濕之特性的各種不同證候。近年來，濕證是中醫(yī)證候研究的熱點和重點具有重要的科學(xué)研究價值，證候的構(gòu)建是中醫(yī)與現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的橋梁和紐帶。構(gòu)建能客觀體現(xiàn)及反映濕證的動物模型是進一步開展臨床和基礎(chǔ)研究的立足點。目前，已有很多的中醫(yī)濕證實驗室研究報道，尤其在各種中醫(yī)濕證動物模型的構(gòu)建及相關(guān)指標(biāo)的檢測。本文將綜述中醫(yī)濕證的理論源流、濕證動物模型分類及濕證模型檢測指標(biāo)及意義的研究進展進行探討，為中醫(yī)濕證動物模型的建立及優(yōu)化研究提供參考及啟示，以期為濕證動物模型的構(gòu)建及濕證生物學(xué)機制研究提供思路。

　　關(guān)鍵詞：中醫(yī)，濕證;濕證動物;動物模型;模型;研究;研究進展

　　濕證的產(chǎn)生，可以外來也可內(nèi)生。外來因素包括：居住卑濕及霧露雨濕等，內(nèi)生因素包括多食生冷及酒酪之品。不論內(nèi)濕及外濕，皆是脾氣虛弱以后，濕邪乘虛而入所致。濕邪作為重要的致病因素，歷代醫(yī)家對其致病機制的理解亦逐步加深。目前現(xiàn)存最早關(guān)于濕邪致病的記載可追溯到戰(zhàn)國時期的醫(yī)籍《五十二病方》，其嬰兒索痙篇中載有“索痙者，如產(chǎn)時居濕地久”表明生產(chǎn)時感受濕邪可致索痙病。

　　中醫(yī)醫(yī)學(xué)論文：中醫(yī)針灸技術(shù)在院外急救的應(yīng)用分析

　　《皇帝內(nèi)經(jīng)》進一步豐富了對濕邪致病的認識，其中《素問生氣通天論篇第三》載“因于濕,首如裹”。濕證之治療，《時病論》中倪松亭云：治濕之道非一，當(dāng)細察而藥之。濕在皮膚常見病證為脾虛濕蘊，脾虛濕蘊證即飲食不節(jié)或稟賦不耐，蘊于肌膚所表現(xiàn)出來的皮損，大便稀溏，舌淡，苔白，脈細滑一類病證，本病證見于蛇串瘡、嬰兒濕疹特應(yīng)性濕疹、黧黑斑、濕瘡。

　　寒濕之邪乘虛而入，阻滯經(jīng)絡(luò)，流注關(guān)節(jié)、肌肉，致使氣血不通，不通則痛;寒濕為陰邪，故四肢疼痛、沉重、乏力。中醫(yī)認為，風(fēng)寒濕合而為痹，造成風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎等。正如《丹溪心法中濕》所載“濕之為病，有自外入者，有自內(nèi)出者”，濕邪分為內(nèi)濕和外濕而致病。吳鞠通《溫病條辨濕》有言“脾主濕土之質(zhì)，為受濕之區(qū)，故中焦?jié)癜Y最多”說明內(nèi)濕主要由于脾胃失司所致，外濕則由外界環(huán)境水濕之邪所致，內(nèi)濕與外濕二者不能完全區(qū)分，往往相互引動而致病。

　　濕證動物模型分類及其造模方法中醫(yī)濕證的理論方法及臨床經(jīng)驗需要運用現(xiàn)代醫(yī)學(xué)方法來進行探討及研究，故采用合適的動物模型，尤其是建立標(biāo)準化中醫(yī)證候(濕證)動物模型是推動中醫(yī)證候研究的重要環(huán)節(jié)。中醫(yī)證候的動物模型應(yīng)以中醫(yī)理論為指導(dǎo)、構(gòu)建的模型癥狀應(yīng)符合中醫(yī)臨床癥狀、具有可重復(fù)及穩(wěn)定性為基本原則。此外，也可用相應(yīng)的藥物干預(yù)進行反證治療。目前，已有中醫(yī)證候模型構(gòu)建的文獻報道，包括模型的建立方法、條件及檢測指標(biāo)進行了相關(guān)的研究，現(xiàn)將該方面的研究進展綜述如下。

　　1.1內(nèi)濕證動物模型

　　1.1.1脾虛濕阻模型陳浩等[1]用復(fù)合造模方法構(gòu)建了脾虛濕阻型大鼠模型，具體方法為：先以高脂飼料(含30%蛋白、10%含高膽固醇的動物油脂、10%膽固醇、1%膽鹽)喂養(yǎng)SD大鼠周，第天開始每日在飼養(yǎng)高脂飼料的基礎(chǔ)上給予每只大鼠4ml冰糖水灌胃(分次，每次2ml)，每日讓大鼠游泳次至耐力極限，其中冰糖灌胃共16天，游泳21天，造模時間共48天。

　　趙文曉等[25]及劉嘉琪等[6]的研究通過每日給予大鼠高脂低蛋白飼料和力竭游泳相結(jié)合的方法構(gòu)建了成功的脾虛濕困大鼠模型。具體操作方法為：模型組及各藥物組給予特制的高脂低蛋白飼料(AIN純化飼料基礎(chǔ)上減少酪蛋白含量,增加豬油和膽固醇制成),每天下午尾部以10%體質(zhì)量負重游泳,入水游至力竭即鼻尖沒入水中10s停止,誘導(dǎo)周，造模時間共周。李堯[7]用苦寒瀉下聯(lián)合饑飽失常方法構(gòu)建了脾虛濕困大鼠模型，其具體造模方法為：每日早晚給大鼠灌胃大黃水煎液約2ml(2ml·100g·d),隔天禁食，飲水自由，造模時間共14天。

　　1.1.2脾虛水濕不化模型

　　王彥芳等[8]依據(jù)中醫(yī)勞倦聯(lián)合飲食傷脾理論成功構(gòu)建了脾虛水濕不化大鼠模型，具體造模步驟為：每日下午將大鼠放入溫度約為20℃±2℃、深約50cm的水中游泳，游泳時以10%體重尾部負重，游泳至鼻尖淹沒入10s時表明大鼠已精疲力竭即停止游泳。造模期間以高脂低蛋白飼料具體成分:15%豬油，5%玉米油，0.2%氯化膽堿，15%淀粉，47.5%蔗糖，5%纖維素，7%酪蛋白，0.5%膽固醇，0.3%蛋氨酸，3.5%多礦，1%多維飼養(yǎng)大鼠，造模時間共周。

　　趙文曉[9]、王彥芳[10]、劉阿娜[11]、韓曉春[12]、趙宏偉[13]、崔寧[14]、李自輝等[1516]給予雄性大鼠高脂低蛋白飼料(在AI76A純化飼料的基礎(chǔ)上減少酪蛋白含量，增加豬油和膽固醇配制而成，成分為蔗糖47.5%，氯化膽堿0.2%，纖維素5%，蛋氨酸0.3%，酪蛋白7%，淀粉15%，玉米油5%，多礦3.5%，豬油15%，多維1%，膽固醇0.5%)喂養(yǎng)，每日以10%體質(zhì)量進行尾部負重游泳(水溫15～20℃，水深40～45cm[15,16])，大鼠鼻尖沒入水中10s以上即判斷為力竭，停止游泳，造模時間共周，成功構(gòu)建了脾虛水濕不化模型。

　　1.1.3痰濕證

　　張春仁[17]通過喂養(yǎng)小鼠60%高脂飼料和30%糖水成功構(gòu)建了內(nèi)濕因素誘導(dǎo)的痰濕證小鼠模型，其造模周期為三個月。周游等[18]每日給予小鼠高脂飼料(具體配方為：50%基礎(chǔ)飼料、10%雞蛋、%香油、20%豬油、%奶粉、白砂糖%、花生%、鹽%)食用構(gòu)建了痰濕證小鼠模型，造模時間共64天。

　　喻松仁等[19]通過給予大鼠高脂飼料喂養(yǎng)周后成功構(gòu)建了痰濕證模型，其高脂飼料是在100g基礎(chǔ)飼料中加入全脂奶粉和豬油各15g、并加入10g蛋黃粉、0.5g豬膽鹽及適量濃縮魚肝油配制而成。姜凌宇[20]、姜月華[21]等通過給予大鼠配制好的高脂飼料亦成功構(gòu)建了痰濕壅盛的大鼠模型，其高脂飼料中含有12%豬油、1%麻油、5%花生粉、10%雞蛋、5%奶粉、5%蔗糖及2%食鹽，此研究中痰濕壅盛證的大鼠模型造模時間為24周。楊海燕等[2223]的研究通過給大鼠喂養(yǎng)高脂飼料周成功構(gòu)建了痰濕證動物模型，其所用高脂飼料含15%豬油、10%蛋黃粉、15%全脂奶粉和0.5%豬膽鹽。

　　1.1.4濕熱證

　　王見文等[24]通過內(nèi)外因素誘導(dǎo)構(gòu)建了脾虛濕熱證小鼠模型，其具體構(gòu)建方法為：以80%基礎(chǔ)飼料、12%豬油、8%蜂蜜配制形成實驗中所需的高脂高糖飼料，每日喂養(yǎng)小鼠以高脂飼料，連續(xù)誘導(dǎo)周后予小鼠以0.3mL/只的劑量H.pylori菌液灌胃，每次間隔時間為48小時，灌胃感染次后定值周，總共造模時間12周。

　　1.2外濕證動物模型

　　榮光莉等[25]等通過外濕因素誘導(dǎo)了小鼠濕熱證模型，研究人員通過利用人工氣候箱聯(lián)合超聲波加濕器來控制造模因素溫度和相對濕度，白天12小時將溫度設(shè)定為，夜間將溫度設(shè)定為(33±2)℃、相對濕度設(shè)置為85%，夜間12小時將將溫度設(shè)定為(20±2)℃、相對濕度設(shè)置為60%，造模時間持續(xù)14天。周欣云等[26]將小鼠每日飼養(yǎng)于溫度設(shè)置為(21±1)℃相對濕度設(shè)置為(90±5)的高濕環(huán)境中12h并予小鼠無卵蛋白飼料喂養(yǎng)，其余時間將小鼠飼養(yǎng)在正常環(huán)境中，從第15天起每日將小鼠置于密閉容器中并用生理鹽水霧化激發(fā)60分鐘,造模時間共21天。

　　謝俏俏等[27]構(gòu)建了寒濕證大鼠模型，具體操作方法為：每日上午12時至下午時將大鼠置于明暗周期為12h/12h的人工氣候室寒濕環(huán)境飼養(yǎng)，人工氣候室中溫度設(shè)置為(4±0.5)℃、濕度設(shè)置為(90±2，其余時間在溫度為18～22℃，相對濕度為50～60%的常規(guī)環(huán)境飼養(yǎng)，造模時間共21天。陳燕等[2829]每日給予小鼠0.1mg/kg皮下注射利血平，連續(xù)誘導(dǎo)14天后構(gòu)建了外濕因素誘導(dǎo)的脾虛證模型。賴鵬華等[30]將小鼠放置于溫度設(shè)置為(33±0.5)℃、相對濕度設(shè)置為(95±5)%的人工氣候箱中天構(gòu)建了濕熱證小鼠模型。

　　2濕證模型檢測指標(biāo)及其意義

　　隨著現(xiàn)代科技的發(fā)展，對于模型的構(gòu)建及評價也越來越多采用現(xiàn)代生物學(xué)指標(biāo)包括蛋白、基因等水平上的評價。使模型的構(gòu)建更加客觀化、指標(biāo)化及標(biāo)準化，促進中醫(yī)證候模型的發(fā)展。目前已有多個指標(biāo)能反映動物模型的部分特征，判定模型是否準確及成功。相關(guān)的檢測指標(biāo)包括：細胞因子及相關(guān)蛋白等。

　　3小結(jié)

　　目前濕證動物模型多采用Balb、C57BL/6小鼠和Wister大鼠等不同品系作為主要的研究動物，造模方法大體可分為外濕因素、內(nèi)濕因素以及內(nèi)外濕因素聯(lián)合應(yīng)用造模。對于外濕因素多數(shù)研究采用人工氣候箱模擬外濕環(huán)境，從文獻綜述可知其溫度、相對濕度及放置時間的條件差異較大。對于內(nèi)濕因素而言，多數(shù)研究采用改變模型動物飲食結(jié)構(gòu)來構(gòu)建內(nèi)濕證模型，如通過提供自行配制或定制的高脂高糖或高蛋白飼料、含糖或含蜂蜜的飲用水飼養(yǎng)而構(gòu)建內(nèi)濕證模型，不同條件方法差異較大。筆者認為基于臨床中醫(yī)證候本身的復(fù)雜性內(nèi)外濕因素綜合造模是比較合適的濕證動物模型，具體的實驗條件還需進一步的實驗驗證。

　　4討論

　　濕證動物模型因涉及多因素，多指標(biāo)及指標(biāo)檢測可重復(fù)性較差，其次各個造模因素如外濕因素溫度、相對濕度、誘導(dǎo)時間、內(nèi)濕造模因素飼料的具體配比等無統(tǒng)一標(biāo)準，后期研究應(yīng)在前人研究的基礎(chǔ)上通過進一步實驗摸索，比較各指標(biāo)、條件差異結(jié)合臨床癥狀予以確定。

　　現(xiàn)階段中醫(yī)證候動物模型尚未成熟，需要不斷完善。而且濕證動物模型并無規(guī)范統(tǒng)一的評價標(biāo)準，從上述研究各項檢測指標(biāo)可以發(fā)現(xiàn)濕邪致病幾乎涉及人體所有系統(tǒng)，這與濕邪致病范圍廣的致病特點相符，正如書中所載“夫濕乃重濁之邪,其傷人最廣”(陸子賢《六因條辨》)，今后應(yīng)不斷探索在前期工作基礎(chǔ)上進一步深入研究探索出規(guī)范的造模條件以及能客觀反映濕證的特異性生物學(xué)指標(biāo)，以期能夠服務(wù)于臨床，為證候診斷以及臨床中治療方法的評價提供參考。

　　參考文獻

　　[1]陳浩,劉志勇,侯吉華等.脾虛濕阻型單純性肥胖動物模型建立及客觀性評價[J].江西中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報,2019,31(06):8486+112.

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　　[3]趙文曉,李軍山,張亞楠等.黃芪多糖對脾虛水濕不化模型大鼠抗疲勞能力的影響[J].時珍國醫(yī)國藥,2019,30(06):13201321.

　　[4]趙文曉,于鎮(zhèn)瑋,崔寧等.黃芪多糖對脾虛水濕不化模型大鼠血清GAS、CCK、VIP及尿木糖排泄率的影響[J].山東中醫(yī)雜志,2019,38(06):573576.

　　[5]趙文曉,崔寧,季旭明等.黃芪及其拆分組分對脾虛水濕不化大鼠礦物質(zhì)吸收相關(guān)基因表達譜的影響[J].中華中醫(yī)藥雜志,2017,32(11):50645067.

　　[6]劉嘉琪,王秋紅,匡海學(xué).防己與茯苓配伍對脾虛水濕不化模型大鼠的影響[J].中華中醫(yī)藥雜志,2017,32(10):44004403.

　　作者：吳清，莫秀梅，陳達燦，晏烽根

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